Nøkkelforskjellen mellom Elisa og Elispot er at Elisa er en enzymkoblet immunosorbentanalyse som bestemmer den totale konsentrasjonen av utskilte signalproteiner, mens Elispot er en enzymkoblet immunsorbentanalyse som oppdager individuelle cytokinutskillende celler.
Elisa og Elispot er to enzymkoblede immunosorbentanalyser som er mye brukt i medisin, plantepatologi, bioteknologi og forskjellige farmasøytiske industrier. I disse teknikkene blir en proteinanalytt oppdaget av et antistoff rettet mot den. Elisa er den mest populære enzymkoblede immunosorbentanalysen som brukes i laboratorier. På den annen side er Elispot en enzymkoblet immunosorbentanalyse som ikke brukes i stedet for Elisa, men brukes i tillegg til Elisa i laboratorier.
Hva er Elisa Assay?
Elisa er en enzymkoblet immunosorbentanalyse som bestemmer den totale konsentrasjonen av utskilte signalproteiner. Det er en mye brukt analytisk biokjemianalyse som først ble beskrevet av Engvall og Perlmann i 1971. Denne teknikken bruker en fastfase type enzymimmunoassay for å påvise tilstedeværelsen av et spesifikt protein i en væskeprøve ved å bruke antistoffer rettet mot dette spesifikke proteinet. Denne analysen er et ofte brukt diagnostisk verktøy innen medisin, plantepatologi og bioteknologi.
Mekanisme for ELISA-test
I det meste av ELISA-testen blir en ukjent mengde antigen immobilisert på en fast bærer (mikroliterplate) i begynnelsen. Deretter påføres det matchende primære antistoffet over den faste støtteoverflaten. Dette antistoffet danner et kompleks med antigenet (antigen-antistoffkompleks). Det antigenbundne primære antistoffet kan påvises av et sekundært antistoff som er koblet til et enzym gjennom biokonjugering. I det siste trinnet av Elisa-testen tilsettes et stoff som inneholder substratet til enzymet. Hvis det er en riktig binding av et primært antistoff til antigenet, produseres en påvisbar fargeendring av substratet. Til syvende og sist kvantifiserer dette antigenet i prøven.
Figur 01: Ulike typer Elisa
Videre er det ulike tilnærminger til Elisa, som direkte Elisa og indirekte Elisa. For tiden brukes ulike Elisa-tester for å oppdage humane patogener som Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, hepatitt B-virus, hepatitt C-virus, enterotoksinproduserende E.coli, HIV og SARS-CoV-2.
Hva er Elispot Assay?
Elispot er en enzymkoblet immunosorbentanalyse som oppdager individuelle cytokin-utskillende celler. Cecil Czerkinsky beskrev ELISpot første gang i 1983. Det er en type analyse som fokuserer på kvantitativ måling av frekvensen av cytokinsekresjon for en enkelt celle. Det er også klassifisert som en teknikk som bruker antistoffer for å oppdage en biologisk eller kjemisk proteinanalyt. Fluorospot-analysen er en variant av Elispot-analysen, som bruker fluorescens for å analysere flere analytter (mer hemmelige proteiner).
Mechanism of Elispot Test
I denne mekanismen tilsettes cytokinspesifikke monoklonale antistoffer til brønnene på mikroliterplater til å begynne med. Deretter tilsettes de ønskede cellene som blir observert til brønnene. Senere inkuberes cellene. Under celleinkubasjonen får cellene reagere på alle stimuli og skille ut cytokin. Cytokinene som har blitt utskilt av de inkuberte cellene vil feste seg til antistoffene siden cellene er omgitt av cytokinspesifikke monoklonale antistoffer.
Figur 02: Elispot Assay
For å oppdage disse cytokinspesifikke monoklonale antistoffene, tilsettes biotinylerte spesifikke deteksjonsantistoffer til brønnen. Biotinylerte spesifikke deteksjonsantistoffer fanger opp de cytokinspesifikke monoklonale antistoffene i brønnene. Dessuten tilsettes streptavidin-enzymkonjugater til brønnene for å binde seg til deteksjonsantistoffene. I det siste trinnet tilsettes spesifikke substrater til brønnene. Reaksjonene til enzymkonjugater og substrater produserer distinkte flekker i brønnene. Disse distinkte punktene leses på en automatisert ELISpot-leser. Til syvende og sist vil dette beregne frekvensen av cytokinsekresjon ytterligere.
Hva er likhetene mellom Elisa og Elispot?
- De er begge enzymkoblede immunosorbentanalyser.
- Begge analysene oppdager spesifikke proteinanalytter.
- Disse analysene bruker spesifikke antistoffer for å identifisere proteinanalyttene.
- Begge analysene bruker enzymer og substrater.
- De brukes som et diagnostisk verktøy i medisinske laboratorier.
Hva er forskjellen mellom Elisa og Elispot?
Elisa er en enzymkoblet immunosorbentanalyse som bestemmer den totale konsentrasjonen av utskilte signalproteiner. På den annen side er Elispot en enzymkoblet immunsorbentanalyse som måler individuelle cytokinutskillende celler. Så dette er nøkkelforskjellen mellom Elisa og Elispot. Dessuten, i Elisa-testen, immobiliseres antigenet først på mikroliterbrønnene. I motsetning til Elispot-testen blir antistoffet først immobilisert på mikroliterbrønnene. Dermed er dette enda en forskjell mellom Elisa og Elispot.
Infografien nedenfor presenterer en detaljert analyse av forskjellen mellom Elisa og Elispot i tabellform.
Sammendrag – Elisa vs Elispot
Elisa og Elispot er to enzymkoblede immunosorbentanalyser som er mye brukt i medisin, plantepatologi, bioteknologi og forskjellige farmasøytiske industrier. Elisa oppdager tilstedeværelsen av en ligand (protein) i en væskeprøve ved å bruke antistoffer rettet mot liganden som skal måles. Elispot-analyse er en mye brukt metode for å overvåke immunresponser. Den oppdager individuelle cytokinutskillende celler ved hjelp av antistoffer. Det er både en immunoassay og bioassayteknikk. Dermed er dette oppsummeringen av forskjellen mellom Elisa og Elispot.
