Nøkkelforskjell – Direkte vs Indirekte ELISA
En enzym-linked immunoassay (ELISA), også kjent som enzym immunoassay, er en serologisk test som oppdager antistoffer i blodet. Det brukes som et diagnostisk verktøy for å finne ut om pasienten har vært utsatt for en bestemt type virus eller et annet smittestoff (antigen) og om kroppen har produsert antistoffer mot infeksjonen. ELISA kan også identifisere tidligere og nåværende infeksjoner. Derfor brukes ELISA ofte som en forhåndsscreeningstest av legene før dybdeanalyse av sykdommer. Denne testen kan utføres i laboratoriet ved å ta en blodprøve fra pasienten. Det er to typer ELISA-test: direkte ELISA og indirekte ELISA. Hovedforskjellen mellom direkte og indirekte ELISA er at indirekte ELISA er mer sensitiv og krever tilsetning av et sekundært antistoff, mens direkte ELISA er mindre følsomt og bare bruker et primært antistoff.
Hva er Direct ELISA?
ELISA er en sykdomsdiagnostisk test utført for å identifisere tilstedeværelsen av bestemte antigener eller antistoffer i blodet. Det gjøres som en plateanalyse. Den bruker antistoffer knyttet til enkelt analyserte enzymer. Antigeners tilstedeværelse i serumprøven binder seg til spesifikke antistoffer knyttet til enzymer. I det siste trinnet tilsettes et spesifikt substrat for å reagere med enzymet. Enzymet omdanner substratet til et farget eller signalproduserende produkt. Fargeendringen i det kjemiske substratet avslører tilstedeværelsen av et bestemt antistoff i serumprøven. Direkte ELISA-test bruker kun et primært antistoff knyttet til enzymet. Ved binding til antigenet endrer det raskt fargen, noe som indikerer tilstedeværelsen av smittestoffet i blodet. Imidlertid er intensiteten til signalene svakere i direkte ELISA siden epitopene er begrenset til binding av antigenene. Derfor er direkte ELISA mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA.
Figur 01: Direkte ELISA-test
Hva er indirekte ELISA?
ELISA kan utføres ved å bruke to typer antistoffer, nemlig; primært antistoff og sekundært antistoff. Indirekte ELISA-verktøy bruker begge typer antistoffer for å forsterke signalene for bedre deteksjon. Indirekte ELISA-teknikk utføres som følger.
- Plater inkuberes med antigener og vaskes for å blokkere uspesifikk binding.
- Deretter tilsettes primære antistoffer og vaskes.
- Enzymkoblet sekundært antistoff tilsettes og vaskes.
- Et substrat tilsettes og får reagere med enzymer.
- Signaler oppdages, og tilstedeværelsen eller fraværet av det spesifikke antigenet i prøven identifiseres.
I indirekte ELISA-test kan flere sekundære antistoffer binde seg til et enkelt primært antistoff. Sekundære antistoffer er knyttet til enkelt analyserte enzymer. Derfor kan én binding gi et sterkt signal på grunn av mer enn én interaksjon. Derfor er indirekte ELISA mer følsom enn direkte ELISA. Indirekte ELISA kan imidlertid lage uspesifikke signaler på grunn av kryssreaksjoner av de sekundære antistoffene.
Figur 02: Indirekte ELISA-test
Hva er forskjellen mellom direkte og indirekte ELISA?
Direkte vs Indirekte ELISA |
|
| Direkte ELISA er mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA. | Indirekte ELISA er mer sensitiv. |
| Tid tatt | |
| Direkte ELISA-test er en rask prosess. | Indirekte ELISA er tidkrevende. |
| Bruk av antistoffer | |
| Bare én type antistoffer (primære antistoffer) brukes i direkte ELISA. | Primære og sekundære antistoffer brukes til indirekte ELISA. |
| Link with Enzymes | |
| Primære antistoffer er knyttet til enzymer. | Sekundære antistoffer er knyttet til enzymer. |
| Cross-Reactivity of Second Antibodies | |
| Direct ELISA eliminerer kryssreaktiviteten til andre antistoffer. | Indirekte ELISA påvirkes av kryssreaktivitet av andre antistoffer. |
| Signals | |
| Signalene er svake sammenlignet med indirekte ELISA. | Signaler forsterkes i indirekte ELISA. Derfor er det lett å oppdage. |
Sammendrag – Direkte vs Indirekte ELISA
ELISA er en biokjemisk teknikk som hovedsakelig brukes innen immunologi for å påvise tilstedeværelsen av et antistoff eller et antigen i en blodprøve fra en pasient. Det kan utføres via to prosesser kjent som direkte eller indirekte ELISA. Direkte ELISA-test bruker kun primære antistoffer for å oppdage antigenet, mens indirekte ELISA bruker både primære og sekundære antistoffer. I direkte ELISA er primære antistoffer merket mens i indirekte ELISA er sekundære antistoffer merket. Dette er forskjellen mellom direkte og indirekte ELISA.
