Nøkkelforskjellen mellom konkurrerende og ikke-konkurrerende ELISA er at konkurrerende ELISA bruker et inhiberingsantigen mens ikke-konkurrerende ELISA ikke bruker et hemmingsantigen for analysen.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) er en immunologisk analyse som oppdager ulike mål som antistoffer, antigener, proteiner og glykoproteiner. Det er en rask og enkel metode å utføre. Derfor brukes det oftere til forskning og diagnostiske formål. ELISA innebærer bruk av enzymer og spesifikk binding av antistoff og antigen. Basert på hvordan reaksjonene oppstår, er det fire typer ELISA: direkte ELISA, indirekte ELISA, sandwich-ELISA og inhiberings-ELISA. Direkte, indirekte og sandwich ELISA er typer ikke-konkurrerende ELISA mens hemming ELISA er en type komplett ELISA. Hovedmålet med denne artikkelen er å diskutere forskjellen mellom konkurrerende og ikke-konkurransedyktig ELISA.
Hva er konkurransedyktig ELISA?
Kompetitiv ELISA måler antigenkonsentrasjonen i en prøve gjennom deteksjon av signalinterferens. Her bruker analysen et inhibitorantigen. Derfor er det en type hemming ELISA. Under denne prosedyren konkurrerer antigenene som er tilstede i prøven med det valgte referanseantigenet om binding til en spesifikk mengde merket antistoff. Videre starter denne prosedyren med inkubasjonen av prøven, med overskytende mengde merket antistoff. Referanseantigenet bør også være forhåndsbelagt på en analyseplate med flere brønner. Deretter skal prøveblandingen legges til analyseplaten som inneholder referanseantigenet. Frie antistoffer vil binde seg til referanseantigenet avhengig av mengden antigen i prøven. Derfor, hvis mer prøveantigen er tilstede, vil mindre referanseantigen bli påvist. Dermed skaper det et svakere signal.
Figur 01: ELISA
Når prøven inneholder mindre antigen, vil mer og mer referanseantigen okkupere antistoffene og gi et sterkt signal. Siden konkurrerende ELISA gir et sterkere signal når prøven inneholder en lav mengde antigener, er kompetitiv ELISA en svært sensitiv analyse, selv for prøver med et lite antall antigener.
I noen konkurrerende ELISA-sett brukes et merket antigen i stedet for et merket antistoff. Her vil det merkede antigenet og prøveantigenet konkurrere om binding til det primære antistoffet. Tilsvarende, når mengden antigen i prøven er lav, vil mengden merket antigen som binder seg til antistoffer være høyere og skape et sterkere signal.
Hva er ikke-konkurransedyktig ELISA?
Blant de fire typene ELISA er tre typer ikke-konkurrerende ELISA. De er direkte ELISA, indirekte ELISA og sandwich ELISA. Alle tre formatene fungerer under det vanlige prinsippet til ELISA med små forskjeller i metodene.
Direct ELISA bruker et enzymmerket primært antistoff. Derfor krever det ikke et sekundært antistoff. Derfor er direkte ELISA raskere enn andre typer ELISA. Det primære antistoffet vil binde seg direkte til det immobiliserte målantigenet som er tilstede i platen. Derfor vil enzym-substratreaksjonen finne sted, og produsere et synlig signal.
Figur 02: Sandwich ELISA
I motsetning til direkte ELISA, bruker indirekte ELISA et umerket primært antistoff og et enzymmerket sekundært antistoff. Når det primære antistoffet binder seg til det immobiliserte antigenet, binder det sekundære antistoffet seg til det primære antistoffet. Enzymet i det sekundære antistoffet vil reagere med antigenet og produsere et synlig signal. Sandwich ELISA er forskjellig fra både direkte og indirekte ELISA. Her er antistoffet immobilisert til veggen av analyseplaten.
Hva er likhetene mellom konkurransedyktig og ikke-konkurransedyktig ELISA?
- Konkurrerende og ikke-konkurrerende ELISA er to typer immunosorberende analyseteknikker.
- De er svært fleksible og sensitive teknikker.
- Videre er både konkurrerende og ikke-konkurransedyktig ELISA enzymkoblede immunanalyser.
- Begge metodene genererer også et signal på grunn av en enzym-substratreaksjon.
Hva er forskjellen mellom konkurransedyktig og ikke-konkurransedyktig ELISA?
Kompetitiv ELISA er en type ELISA som er avhengig av komplettering mellom analyttantigen og merket antigen for en begrenset mengde spesifikt antistoff. På den annen side eksisterer ingen slik konkurranse mellom antigen av interesse og referanseantigen i ikke-konkurrerende ELISA. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom konkurrerende og ikke-konkurrerende ELISA. Tilsvarende er kompetitiv ELISA en hemmings-ELISA mens ikke-konkurrerende ELISA ikke er en hemmende ELISA. Så dette er også en forskjell mellom konkurrerende og ikke-konkurransedyktig ELISA.
I tillegg er konkurrerende ELISA mer egnet for å måle en lav mengde antigen av interesse. Det er en sensitiv metode. På den annen side er ikke-konkurrerende ELISA avhengig av antall antigener som er tilstede i en prøve. Derfor er dette også en forskjell mellom konkurrerende og ikke-konkurransedyktig ELISA.
Infografikken nedenfor forklarer forskjellen mellom konkurrerende og ikke-konkurransedyktig ELISA relativt sett.
Sammendrag – Konkurrerende vs ikke-konkurransedyktig ELISA
Kompetitiv og ikke-konkurrerende ELISA er de to hovedtypene av ELISA eller enzymkoblede immunsorbentanalyser. For å oppsummere forskjellen mellom konkurrerende og ikke-konkurrerende ELISA, er den konkurrerende ELISA avhengig av konkurransen mellom antigen av interesse og referanseantigen mot den begrensede mengden antistoffer. Derfor kalles konkurrerende ELISA også som inhiberings-ELISA. På den annen side er ikke-konkurrerende ELISA avhengig av konkurransen mellom målantigener og referanseantigener. Den bruker et overskudd av merket spesifikt antistoff mot analytten av interesse. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom konkurrerende og ikke-konkurrerende ELISA. Direkte ELISA, indirekte ELISA og sandwich-ELISA er de tre hovedtypene av ikke-konkurrerende ELISA.
