Nøkkelforskjellen mellom mikronukleus- og kometanalyse er at mikronukleusanalyse er viktig for å sjekke kromosomskade som en konsekvens av mutageneksponering, mens kometanalyse er viktig for å oppdage primær DNA-skade i individuelle celler.
Genotoksisitetsanalyser hjelper til med å vurdere mulighetene for mutasjoner og kromosomavvik. Genotoksiner inkluderer kjemiske stoffer og stråling. Kreftfremkallende stoffer, mutagener og teratogener er hovedkategoriene av genotoksiner. De forårsaker ulike skader som punktmutasjoner, delesjoner, enkelt- og dobbelttrådsbrudd, kromosomavvik, mikronukleiformasjoner, DNA-reparasjon og cellesyklusinteraksjoner. Slike tilstander kan føre til en lang rekke sykdommer, og genotoksisitetsanalyser forhindrer potensiell skade fra disse tilstandene. Mikronukleusanalyse og kometanalyse er to teknikker under genotoksisitetsanalyser.
Hva er Micronucleus Assay?
Micronucleus assay er en analyse for å vurdere kromosomskade som følge av mutagen eksponering. Det er viktig ved screening av kjemikalier som forårsaker spindeldannelse og mikrokjerner. En mikronukleusanalyse gir informasjon om stabiliteten til kjemikalier når den forstyrrer kromosomstruktur og funksjon. Mange kreftfremkallende stoffer tester positivt i mikronukleusanalyser. Analyseprosessen involverer en kjemisk behandling og måling av frekvensen av mikronukleerte celler. Hvis det er en unormal økning i antall mikronukleiceller, konkluderer den med at kjemikaliet induserer kromosomskade.
En mikronukleusanalyse utføres vanligvis på aktivt delende celler. Derfor er erytrocytter og benmargsstamceller produsert gjennom celledeling ideelle kandidater for slike analyser. De opplever en konstant og rask omsetning. Siden erytrocytter ikke har noen ekte kjerner, gjør det mikronukleerte celler mer synlige på slutten av analysen.
Figur 01: Mikronukleusanalyseobservasjon
Micronucleus-analyser er økonomiske, raskere, praktiske og krever færre ferdigheter å utføre. De reflekterer kromosomavvik raskt på en pålitelig måte og er ekstremt nyttige for raskt å vurdere kromosomskader. En spesiell og allsidig type mikronukleusanalyse er cytokinesis blokk mikronukleus cytome (CBMNcyt) analysen. Det er den foretrukne analysen for å måle kromosomskader og ustabilitet i celler. Imidlertid er hovedproblemet med å bruke mikronukleusanalyse at den ikke er i stand til å bestemme ulike typer kromosomavvik, og analysen har innflytelse på mitotisk hastighet og andel av celledød, noe som fører til at resultatene endres.
Hva er Comet Assay?
Comet assay, som også er kjent som single gel electrophoresis assay, er en enkel og sensitiv teknikk for å oppdage DNA-skader. Den måler DNA-bruddene i eukaryote celler og er en standardteknikk for biomonitorering og genotoksisitetstesting.
Kometanalysen er involvert i innkapsling av celler i agarosesuspensjoner med lavt smeltepunkt, lysering av celler under nøytrale eller alkaliske forhold, og elektroforese av suspenderte lyserte celler. Under innkapslingsprosessen blir cellene suspendert i smeltet agarose med lavt smeltepunkt, og agarosen danner en matrise av karbohydratfibre for å forankre dem på plass. Agarose er osmotisk nøytral; derfor gjør den det mulig for løsningene å trenge gjennom gelen og påvirke cellene uten å forstyrre og forskyve dem. Lyseløsningen er en høykonsentrert vandig s altløsning og et vaskemiddel. Dette s altet forstyrrer proteiner og bindingsmønstrene i cellen samtidig som det forstyrrer RNA-innholdet i cellen. Cellene ødelegger, og alle proteiner, RNA, cytoplasmatiske og nukleoplasmatiske bestanddeler, forstyrrer og diffunderer inn i agarosematrisen og etterlater DNA.
Figur 02: Comet Assay
Elektroforeseløsningen er en alkalisk løsning hvor DNA-dobbelhelixen denaturerer, og nukleoiden blir enkelttrådet. Under denne prosessen påføres et elektrisk felt for å analysere bildene. Bildeanalysen måler den generelle intensiteten av fluorescensen for DNA og nukleoid og sammenligner de to. Den generelle strukturen ligner en komet med et sirkulært hode som tilsvarer det gjenværende uskadede DNA og en hale for det skadede DNA. Jo lysere og lengre halen på grunn av sterkere signaler, desto høyere skadenivå.
Hva er likhetene mellom Micronucleus og Comet Assay?
- Micronucleus og kometanalysen er økonomiske, raskere, praktiske og krever færre ferdigheter.
- De utføres hovedsakelig på DNA.
- Begge analysene hjelper til med å vurdere mutasjoner og kromosomavvik.
- I tillegg bruker begge teknikkene kjemikalier for å utføre prosedyren.
Hva er forskjellen mellom mikrokjerne- og kometanalyse?
Mikronukleusanalysen er viktig for å kontrollere kromosomskader som følge av mutageneksponering, mens kometanalysen er viktig for å oppdage primær DNA-skade i individuelle celler. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom mikronukleus og kometanalyse. Mikronukleusanalysen er også godt etablert for å oppdage klastogenisitet og aneugenisitet. Kometanalysen brukes som en genotoksisitetstest for å oppdage primær DNA-skade i celler. Dessuten gir en mikronukleusanalyse informasjon om stabiliteten til kjemikalier, mens en kometanalyse er en encellet gelelektroforese.
Infografikken nedenfor presenterer forskjellene mellom mikrokjerne- og kometanalyse i tabellform for side ved side-sammenligning.
Sammendrag – Micronucleus vs Comet Assay
Genotoksisitetsanalyser hjelper til med å vurdere mulighetene for mutasjoner og kromosomavvik. Mikronukleusanalyse og kometanalyse er to teknikker under genotoksisitetsanalyser. Mikronukleusanalyse vurderer kromosomskade som følge av mutagen eksponering. Comet assay er en enkel og sensitiv teknikk for å oppdage DNA-skader. Så dette er nøkkelforskjellen mellom mikronukleus og kometanalyse. Mikronukleusanalyse er viktig i screening for kjemikalier som forårsaker spindeldannelse og mikrokjerner. Comet-analyse er involvert i innkapsling av celler i agarosesuspensjoner med lavt smeltepunkt, lysering av celler under nøytrale eller alkaliske forhold, og elektroforese av suspenderte lyserte celler.
