Nøkkelforskjell – immunfluorescens vs immunhistokjemi
Sykdomsdiagnostikk, som bruker molekylærbiologiske metoder, har blitt et voksende område innen klinisk laboratorieteknologi. Den inkluderer alle tester og metoder for å identifisere en sykdom og forstå årsaken til en sykdom ved å analysere DNA, RNA eller uttrykte proteiner i en organisme. Raske fremskritt innen molekylær diagnostikk har muliggjort grunnleggende forskning på smittsomme og ikke-smittsomme sykdommer. Disse brukes til å bestemme endringer i sekvens eller uttrykksnivåer i viktige gener eller proteiner involvert i sykdom. Immunfluorescens (IF) og Immunohistokjemi (IHC) er to slike mye brukte teknikker innen kreftbiologi. IF er en type IHC der en fluorescensdeteksjonsmetode brukes til å analysere monoklonale og polyklonale antistoffer, mens IHC bruker kjemiske baserte metoder for å oppdage de monoklonale og polyklonale antistoffene. Dette er hovedforskjellen mellom IF og IHC.
Hva er immunfluorescens (IF)?
Immunofluorescens er en deteksjonsteknikk der antistoffene som brukes i analysen merkes med fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende proteiner for deteksjonsformålet. Merkede sekundære antistoffer kan resultere i uønskede bakgrunnssignaler; derfor er IF-teknikken basert på merking av selve primærantistoffet for øyeblikket for å unngå uønskede signaler under påvisning. Gjennom denne teknikken forhindres ikke-spesifikk binding mellom det primære og det sekundære antistoffet, og det er raskere siden det ikke er noe sekundært inkubasjonstrinn involvert. Datakvaliteten er også forbedret.
Figur 01: Dobbel immunfluorescensfarging for BrdU, NeuN og GFAP
Fluorokromer eller fluorescerende fargestoffer er forbindelser som kan absorbere stråling, gjerne ultrafiolett stråling som eksiteres. Når partiklene når grunntilstanden fra den eksiterte tilstanden, sender de ut stråling som fanges opp og detekteres av en detektor for å danne et spektrum. Det er av stor betydning at den fluorescerende etiketten er kompatibel og stabil for den spesielle reaksjonen, og den bør være riktig konjugert til antistoffet for å oppnå nøyaktige resultater. En av de mest brukte fluorokromene er fluorescein isothiocyanat (FITC), som er av grønn farge, med absorpsjons- og emisjonstoppbølgelengder på henholdsvis 490 nm og 520 nm. Rhodamine, et annet middel som brukes i IF, er rød i fargen og har distinkte absorpsjons- og emisjonstoppbølgelengder på 553 nm og 627 nm.
Hva er immunhistokjemi (IHC)?
IHC er en molekylær testmetode som praktiseres for å identifisere og bekrefte tilstedeværelsen av antigenet i målcellen. Målcellen kan være en smittsom partikkel, et mikrobiell patogen eller en ondartet tumorcelle. IHC bruker monoklonale og polyklonale antistoffer for å bestemme tilstedeværelsen av antigener på celleoverflaten til målcellene. Teknikken er basert på antigen-antistoffbinding. En deteksjonsmarkør er konjugert til disse antistoffene for å påvise tilstedeværelsen eller fraværet av det spesielle antigenet. Disse markørene kan være kjemiske markører som enzymer, fluorescensmerkede antistoffer eller radiomerkede antistoffer.
Figur 02: Muse-hjerne-skive farget av immunhistokjemi
Den mest populære anvendelsen av IHC er i kreftcellebiologi for å identifisere tilstedeværelsen av ondartede svulster, men den brukes også til påvisning av infeksjonssykdommer.
Hva er likhetene mellom immunfluorescens og immunhistokjemi?
- Immunofluorescens og immunhistokjemi finner sted under in vitro-forhold.
- Begge teknikkene er basert på antigen-antistoffet
- Begge er veldig raske teknikker.
- Resultatene av teknikkene er reproduserbare.
- Begge har forbedret datakvalitet.
- Disse teknikkene som brukes i diagnostikk for kreft og infeksjonssykdommer.
Hva er forskjellen mellom immunfluorescens og immunhistokjemi?
Immunofluorescens vs Immunohistochemistry |
|
| IF er en deteksjonsteknikk der antistoffene som brukes i analysen merkes med fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende proteiner for deteksjon. | IHC er en deteksjonsteknikk der antistoffene som brukes i analysen merkes med kjemikalier eller radioaktive elementer for deteksjon. |
| Nøyaktighet | |
| Nøyaktigheten er høyere i IF-teknikk sammenlignet med IHC. | Nøyaktigheten er lavere i IHC. |
| Spesificity | |
| IF er mer spesifikt. | IHC er mindre spesifikk. |
Sammendrag – Immunofluorescens vs Immunohistochemistry
Molekylære mekanismer har ført til mange endringer innen medisin, og har gitt opphav til avanserte molekylære testmetoder som har ført til revolusjoner innen diagnostikk. Disse oppfinnelsene har ført til en rask og nøyaktig identifisering og bekreftelse av sykdommen, og har derved muliggjort vellykket administrering og produksjon av legemidler. Disse teknikkene brukes også i farmakologi for å finne målene til legemidler og for å bekrefte de farmakokinetiske egenskapene til legemidlet under legemiddelmetabolisme. IF og IHC er to diagnostiske metoder som er basert på konseptet antigen og antistoffbinding, selv om påvisningsmåten i begge teknikkene er forskjellige. IF bruker fluorescensprinsippet for å detektere antigenet og IHC bruker konseptet med kjemisk konjugering for å oppdage antigenet. Dette er forskjellen mellom IF og IHC.
Last ned PDF-versjon av Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til offline-formål i henhold til sitat. Last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom immunfluorescens og immunhistokjemi.
