Nøkkelforskjellen mellom BL21 og DH5 Alpha er at BL21 er en protease-mangelfull genetisk konstruert kompetent E. coli-celle som hovedsakelig brukes til proteinekspresjon, mens DH5 Alpha er en genetisk konstruert kompetent E. coli-celle med recA1-mutasjon som hovedsakelig brukes for plasmidtransformasjon.
E. coli er en av de kjente organismene som velges for rekombinant proteinproduksjon. Det har blitt den mest populære uttrykksplattformen gjennom årene. Den brukes også som cellefabrikk. BL21 og DH5 Alpha er to genetisk konstruerte E. coli-celler som for tiden brukes til henholdsvis proteinekspresjon og plasmidtransformasjon.
Hva er BL21?
BL21 er en protease-mangelfull genetisk konstruert kompetent E.coli-celle primært brukt for proteinekspresjon. E. coli BL21 er en bakteriecelle avledet fra B-stammen. Den har defekter av Lon-protease og ompT ytre membranprotease. Det brukes ofte for rekombinant proteinuttrykk fordi det norm alt gir stabilitet til uttrykte proteiner. BL21 er nyttig for proteinekspresjon med pCold I-IV DNA og pCold TF DNA. Men denne kompetente E. coli-cellen er ikke ment for et proteinekspresjonssystem som bruker T7-promoter slik som pET-system. Årsaken bak dette er at BL21 ikke uttrykker T7 RNA-polymerase. I tillegg anbefales det ikke å bruke for konstruksjon eller fremstilling av plasmid siden det ikke har recA-mutasjon.
Figur 01: BL21
BL21 ble først beskrevet av Studier i 1986 etter forskjellige modifikasjoner av B-linjen. BL21-celler mangler LON-proteasen, som bryter ned mange fremmede proteiner. Videre mangler det et annet gen som koder for den ytre membranproteasen (OmpT) hvis funksjon er å bryte ned ekstracellulære proteiner. Mangel på disse proteinene utløser vellykket produksjon av fremmed protein i E. coli BL21-celler. Videre forhindrer hsdSB-mutasjon i disse cellene fremmed DNA-metylering og forstyrrelse i BL21-cellene.
Hva er DH5 Alpha?
DH5 Alpha er en genetisk konstruert kompetent E. coli-celle med recA1-mutasjon som primært brukes til plasmidtransformasjon. DH5 Alpha E. coli-celler er genetisk konstruert av den amerikanske biologen Douglas Hanahan for å maksimere effektiviteten av transformasjonen. DH5 Alpha-celle har tre distinkte mutasjoner: recA1, endA1 og lacZΔM15. recA1 er en enkeltpunktmutasjon som erstatter glycin 160 med og en asparaginsyrerest i recA-polypeptidet. Denne mutasjonen deaktiverer aktiviteten til rekombinasene og inaktiverer homolog rekombinasjon. endA1-mutasjon inaktiverer en intracellulær endonuklease som hindrer den i å bryte ned det innsatte plasmidet.
Figur 02: DH5 Alpha
I tillegg muliggjør lacZΔM15-mutasjon blå-hvit screening av transformerte celler. Disse cellene er kompetente celler. De brukes ofte med kalsiumkloridtransformasjon for å sette inn ønsket plasmid. Det ble identifisert av nyere forskning at DH5 Alpha-cellen med Hanahan-metoden var den mest effektive kompetente cellen for plasmidtransformasjon.
Hva er likhetene mellom BL21 og DH5 Alpha?
- BL21 og DH5 Alpha er to genetisk konstruerte E.coli
- Begge er kompetente celler.
- De består av distinkte mutasjoner.
- Begge har ingen naturlig habitat.
- Disse brukes til laboratorieformål som ekspresjonsstudier og kloningsprosedyrer.
Hva er forskjellen mellom BL21 og DH5 Alpha?
BL21 er en protease-mangelfull genetisk konstruert kompetent E. coli-celle primært brukt for proteinekspresjon. På den annen side er DH5 Alpha en genetisk konstruert kompetent E. coli-celle med recA1-mutasjon primært brukt til plasmidtransformasjon. Så dette er nøkkelforskjellen mellom BL21 og DH5 Alpha. Videre har BL21 E. coli-cellen ikke recA1-mutasjon, mens DH5 Alpha E. coli-cellen har recA1-mutasjon.
Følgende infografikk viser forskjellene mellom BL21 og DH5 Alpha i tabellform.
Sammendrag – BL21 vs DH5 Alpha
De ikke-patogene stammene av E. coli er genetisk utviklet av forskere for laboratorieekspresjonsstudier og kloningsformål. BL21 og DH5 Alpha er to genetisk konstruerte E. coli-celler. BL21 brukes først og fremst til proteinekspresjonsstudier. På den annen side brukes DH5 Alpha først og fremst til plasmidtransformasjonsformål. Dermed er dette sammendraget av forskjellen mellom BL21 og DH5 Alpha.
