Nøkkelforskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens er at den direkte immunofluorescensen bruker et enkelt antistoff som virker mot målet av interesse, mens den indirekte immunofluorescensen bruker to antistoffer for å merke målet av interesse.
Immunofluorescens eller celleavbildning er en teknikk som brukes til å merke et spesifikt målantigen med en fluorofor. Her er fluoroforen en fluorescerende kjemisk forbindelse som kan gjenutsende lys ved lyseksitasjon. Når en fluorofor binder seg til målantigenet, tillater den påvisning av målmolekylet i prøven. For å beskrive det videre, når et antigen binder seg til et spesifikt antistoff, kan det konjugeres med fluoroforer. Derfor er det lett å oppdage tilstedeværelsen av målantigenet i prøven når du observerer under fluorescensmikroskopet.
Dessuten er det to typer immunfluorescens; direkte og indirekte immunfluorescens. Forskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens ligger hovedsakelig i antall antistoffer som brukes og fluorofor-konjugasjonen. Det vil si at i direkte immunfluorescens konjugerer fluoroforen direkte til det primære antistoffet, mens i indirekte immunfluorescens konjugerer fluoroforen med det sekundære antistoffet.
Hva er direkte immunfluorescens?
Immunofluorescens bruker antistoffer for å oppdage spesifikke målantigener. Direkte immunfluorescens er en av de to typene immunfluorescens. I direkte immunfluorescens involverer et enkelt antistoff (primært antistoff), og fluoroforen konjugerer direkte med det primære antistoffet. Ved binding av antistoffet med målantigenet, avgir fluorofor fluorescens som kan påvises med et fluorescensmikroskop.
Figur 01: Direkte immunfluorescens
Direkte immunfluorescens er imidlertid en kostbar metode siden de primære konjugerte antistoffene er kostbare sammenlignet med de sekundære antistoffene. Likevel innebærer det ikke et ekstra trinn, altså en kortere teknikk. Videre reduseres ikke-spesifikke bindinger i direkte immunfluorescens. Derfor er artskryssreaktivitet lav. Men ved deteksjon er sensitiviteten til den direkte immunfluorescensen svak sammenlignet med den indirekte immunfluorescensen.
Hva er indirekte immunfluorescens?
Indirekte immunfluorescens er den andre typen av immunfluorescens som involverer to typer antistoffer som primære og sekundære antistoffer i merkingen av målantigenet. I denne metoden konjugerer fluoroforen med det sekundære antistoffet. Derfor innebærer denne teknikken et ekstra trinn.
Figur 02: Immunfluorescens
Følsomheten er imidlertid høy i denne metoden siden flere fluoroforer kan konjugeres til sekundære antistoffer og det gjør deteksjonen enklere. Videre er indirekte immunfluorescens rimeligere på grunn av det faktum at konjugeringen av sekundære antistoffer er rimeligere og enklere. Sammenlignet med den direkte immunfluorescensen er artskryssreaktiviteten høy i den indirekte metoden.
Hva er likhetene mellom direkte og indirekte immunfluorescens?
- De er to typer immunfluorescensteknikker.
- Primære antistoffer og fluorofor er involvert i begge metodene.
- Antigen-antistoffreaksjonen forekommer også i begge metodene.
- I tillegg bruker både direkte og indirekte immunfluorescens et fluorescensmikroskop for påvisning av antigen.
Hva er forskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens?
Immunofluorescens kan være direkte eller indirekte basert på fluorofor-konjugasjonen med antistoffene som brukes. Ved direkte immunfluorescens konjugerer fluoroforen med det primære antistoffet, som er det eneste antistoffet som involverer denne teknikken. I motsetning til det, i indirekte immunfluorescens, konjugerer fluoroforen med det sekundære antistoffet, som er en av de to typene antistoffer som er involvert i teknikken. Derfor er hovedforskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens antistofftypen som konjugerer med fluoroforen.
Følgende infografikk gir en side ved side sammenligning av forskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens.
Sammendrag – Direkte vs Indirekte immunfluorescens
Immunofluorescens er en teknikk som brukes til å påvise tilstedeværelsen av spesifikke antigener i en prøve. Denne teknikken bruker spesifikke antistoffer. Derfor, i dette, konjugerer antistoffene med fluoroforer for å oppdage dem ved hjelp av et fluorescerende mikroskop. Dessuten er det to typer immunfluorescens, nemlig direkte og indirekte immunfluorescens. Direkte immunfluorescens involverer et enkelt antistoff og fluorofor direkte konjugert til dette antistoffet. Indirekte immunfluorescens involverer to antistoffer; primær og sekundær og fluorofor konjugert til det sekundære antistoffet. Siden flere sekundære antistoffer kan binde seg til et primært antistoff og flere fluoroforer kan konjugere med sekundære antistoffer, er indirekte immunfluorescens en mer sensitiv metode enn den direkte metoden. Videre er den indirekte metoden rimeligere enn den direkte metoden. Dette er altså forskjellen mellom direkte og indirekte immunfluorescens.
