Nøkkelforskjellen mellom immunutfelling og koimmunutfelling er at immunutfelling er en teknikk som presipiterer et protein ut av løsningen ved hjelp av et spesifikt antistoff, mens koimmunutfelling er en teknikk som utfeller intakte proteinkomplekser ut av løsningen ved hjelp av et spesifikt antistoff.
Antigen-antistoff-interaksjon er en spesifikk kjemisk interaksjon mellom antistoffer produsert av B-celler og antigener (proteiner) under en immunreaksjon. Norm alt kombineres løselige antigener med løselige antistoffer i nærvær av en elektrolytt ved løselig temperatur og pH for å lage et uløselig synlig kompleks. Dette kalles en nedbørsreaksjon. Derfor er immunutfelling og koimmunutfelling to typer utfellingsreaksjoner som rutinemessig brukes i laboratorier for å identifisere proteiner som antigener.
Hva er immunutfelling?
Immunutfelling er en teknikk for å presipitere et protein ut av en løsning ved å bruke et spesifikt antistoff. Noen ganger er denne teknikken også kjent som individuell proteinimmunutfelling. Immunutfelling bruker et antistoff for å isolere et utvalgt protein av interesse fra cellelysat. Antistoffet renser sitt spesifikke målprotein eller antigen fra en blanding. Antistoffet binder seg til proteinet, og antistoff-antigenkomplekset trekkes ut av prøven. I det eksperimentelle oppsettet trekkes antigen-antistoffkomplekset ut ved å bruke protein A/G-koblet agarose eller magnetiske perler. Senere vaskes perlene, og proteinet av interesse elueres. Det rensede proteinet eller antigenet oppnådd ved immunutfelling verifiseres ved hjelp av en rekke teknikker som enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) og western blot (WB).
Figur 01: Immunutfelling
Videre kan isolerte proteiner eller antigener kvantifiseres og identifiseres gjennom massespektrometri ved å bruke enzymatiske fordøyelsesmønstre basert på primærsekvensen. Det er visse hensyn før du starter et immunutfellingseksperiment: valg av metodeformat, binding av proteiner og perler, valg av riktig primærantistoff og isotype, og negativ kontroll.
Hva er Coimmunoprecipitation?
Coimmunopresipitering er en teknikk for å presipitere intakte proteinkomplekser ut av løsningen ved å bruke et spesifikt antistoff. Samimmunutfelling fungerer vanligvis ved å velge et spesifikt antistoff som retter seg mot et kjent protein (antigen) som antas å være medlem av et større kompleks av proteiner. Ved å målrette det kjente medlemmet med et spesifikt antistoff, er det mulig å trekke hele proteinkomplekset ut av løsningen. Dette gjør det mulig å identifisere de ukjente medlemmene av komplekset. Konseptet med å trekke proteinkomplekser ut av løsningen blir noen ganger referert til som "pull-down"-mekanisme.
Figur 02: B Coimmunoprecipitation
Coimmunoprecipitation er en kraftig teknikk som brukes til å analysere protein-protein-interaksjoner. Hovedformålet med koimmunutfelling er identifisering av interagerende partnere som ligander, kofaktorer eller signalmolekyler til proteinet av interesse. Dessuten er koimmunutfelling en effektiv teknikk som brukes til å skille proteiner fra serum, cellelysat, homogenisert vev eller kondisjonerte medier.
Hva er likhetene mellom immunutfelling og koimmunutfelling?
- Immunutfelling og koimmunutfelling er to typer utfellingsreaksjonsbaserte teknikker.
- Begge teknikkene kan brukes til å identifisere målantigen gjennom et spesifikt antistoff.
- Begge teknikkene er sterkt avhengig av antigen-antistoff-interaksjon.
- De brukes rutinemessig i kliniske laboratorier.
Hva er forskjellen mellom immunutfelling og koimmunutfelling?
Immunutfelling er en teknikk som presipiterer et protein ut av løsningen ved hjelp av et spesifikt antistoff, mens koimmunutfelling er en teknikk som utfeller intakte proteinkomplekser ut av løsningen ved hjelp av et spesifikt antistoff. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom immunutfelling og koimmunutfelling. Videre er immunutfelling mer vanlig i laboratorier, mens koimmunutfelling ikke er vanlig i laboratorier.
Infografien nedenfor presenterer forskjellene mellom immunutfelling og koimmunutfelling i tabellform for sammenligning side ved side.
Summary – Immunoprecipitation vs Coimmunoprecipitation
Immunutfelling og koimmunutfelling er to typer utfellingsreaksjonsbaserte teknikker som er avhengige av antigen-antistoffinteraksjon. Immunutfellingsteknikken presipiterer et protein ut av løsningen ved å bruke et spesifikt antistoff, mens koimmunutfellingsteknikken feller ut intakte proteinkomplekser ut av løsningen ved å bruke et spesifikt antistoff. Så dette oppsummerer forskjellen mellom immunutfelling og koimmunutfelling.
