Nøkkelforskjell – HPLC vs HPTLC
Nøkkelforskjellen mellom HPLC og HPTLC er at HPLC tillater kvantitativ separering av komponenter i en prøve, mens HPTLC ikke tillater kvantitativ separering av komponenter i en prøve.
Kromatografi er en fysisk separasjonsmetode som brukes til å separere og identifisere komponentene i en blanding. Både HPLC og HPTLC er kromatografiske teknikker. HPLC er høyytelses væskekromatografi. HPTLC er tynnsjiktskromatografi med høy ytelse.
Hva er HPLC?
HPLC er væskekromatografi med høy ytelse. Det er en analytisk teknikk som brukes til å skille, identifisere og kvantifisere komponenter i en blanding. I denne teknikken løses prøven i et passende løsningsmiddel. Deretter føres løsningsmidlet med prøven gjennom en pumpe med et gitt trykk. Pumpen er fylt med fast adsorberende materiale. Da binder noen komponenter seg sterkt til det absorberende materialet, mens andre komponenter binder seg løst. Dette fører til at komponentene har forskjellige strømningshastigheter gjennom pumpen. Derfor kan komponentene enkelt skilles.
Figur 01: Et HPLC-system
Adsorbentmaterialet som fyller pumpen er kjent som den stasjonære fasen. Løsningsmidlet med den oppløste prøven er kjent som den mobile fasen. Pumpen som brukes i denne teknikken kalles kolonnen. Kolonnen er fylt med et adsorberende materiale, oftest silikapartikler. Størrelsen på disse partiklene kan variere fra 2-50 μm. Separasjonsprosessen påvirkes av sammensetningen av den mobile fasen og temperaturen i systemet. Interaksjonene mellom den stasjonære fasen og komponenten i prøven kan være hydrofobe interaksjoner, dipol-dipol interaksjoner, ionisk binding osv.
Operasjonstrykket til HPLC er betydelig høyere enn for tradisjonell væskekromatografi. Den ligger rundt 50-350 bar. Forskjellen mellom væskekromatografi og HPLC er at ved væskekromatografi faller prøven gjennom kolonnen under tyngdekraften, mens prøven ved HPLC settes under trykk gjennom kolonnen. Størrelsen på kolonnen og de absorberende partiklene er også svært små sammenlignet med tradisjonell væskekromatografi. Oppløsningen gitt av HPLC-teknikken er imidlertid overlegen.
Hva er HPTLC?
HPTLC er tynnsjiktskromatografi med høy ytelse. Det er den avanserte og automatiserte formen for tradisjonell TLC. Denne teknikken gir en effektiv oppløsning på kort tid. I denne analysemetoden kan prøven og en referanse analyseres samtidig, noe som gjør at prøven kan sammenlignes med referansen. Det gir en forbedret analytisk nøyaktighet enn andre kromatografiske teknikker. Tiden det tar for analysen er mindre. Teknikken er en rimelig teknikk.
Figur 02: En analyse av matfargestoffer ved bruk av HPTLC
HPTLC-metoden er en enkel prosess, og prøveklargjøringstrinnet er også eliminert (I tradisjonell TLC er prøveprepareringstrinnet inkludert før separasjonen. Dette trinnet involverer rengjøring og anrikning). Løsningsmidlet kan brukes direkte uten forbehandling, selv om andre kromatografiske teknikker krever forbehandlinger som avgassing, filtrering osv.
Adsorbentmaterialet som brukes i HPTLC er silika med svært små partikkelstørrelser. I tradisjonell TLC er partikkelstørrelsen til silika 5-20 μm, mens den i HPTLC er 4-8 μm. Prøven påføres HPTLC-platen ved hjelp av en applikator. Det gir en jevn og sikker påføring. Deretter plasseres platene i et kammer som har den mobile fasen. Kammeret skal være mettet med dampen fra den mobile fasen. Etter HPTLC-prosessen kan flekkene som har beveget seg oppdages. Når flekkene på platen detekteres, bruker HPTLC-teknikken et passende UV-område eller et jodkammer.
Hva er forskjellen mellom HPLC og HPTLC?
HPLC vs HPPTLC |
|
| HPLC er væskekromatografi med høy ytelse. | HPTLC er tynnsjiktskromatografi med høy ytelse. |
| Teknikk | |
| I HPLC føres den mobile fasen med løsningsmidlet gjennom en kolonne fylt med den stasjonære fasen. | I HPTLC blir prøven flekket på en TLC-plate og plassert inne i et kammer som inneholder den mobile fasen; deretter får prøven migrere oppover platen sammen med den mobile fasen. |
| Measurement | |
| I HPLC brukes forskjellene mellom strømningshastighetene til komponentene gjennom kolonnen for å skille komponentene i prøven. | I HPTLC brukes forskjellene mellom avstander tilbakelagt av hver komponent i prøven for å skille komponentene i prøven. |
| Kvantitativ separasjon | |
| HPLC tillater kvantitativ separering av komponenter i en prøve. | HPTLC tillater ikke kvantitativ separering av komponenter i en prøve. |
Sammendrag – HPLC vs HPTLC
HPLC og HPTLC er to kromatografiske teknikker. Hovedforskjellen mellom HPLC og HPTLC er at HPLC tillater kvantitativ separasjon av komponenter i en prøve, mens HPTLC ikke tillater kvantitativ separering av komponenter i en prøve.
