Nøkkelforskjellen mellom omvendt fase og normal fase HPLC er at omvendt fase HPLC bruker en ikke-polar stasjonær fase og en polar mobil fase, mens normal fase HPLC bruker en polar stasjonær fase og en mindre polar mobil fase.
HPLC i normal fase er den eldste HPLC-teknikken som Tswett brukte i sine separasjoner av planteekstrakter; han brukte kritt i en glassøyle. Dette var den klassiske modusen for kromatografi som førte til å navngi den som den "normale" teknikken. Revers-fase HPLC, derimot, er det motsatte av den vanlige teknikken, som forskere utviklet i det siste.
Hva er omvendt fase HPLC?
Reversfase HPLC er en kromatografisk teknikk der vi bruker en hydrofob stasjonær fase. Blant alle HPLC-metoder bruker vi denne metoden for omtrent 70 % på grunn av dens brede anvendelighet og reproduserbarhet. Den stasjonære fasen er upolar og den mobile fasen er polar.
De fleste gangene bruker forskere en vandig blanding av vann med et blandbart, polart organisk løsningsmiddel, for eksempel acetonitril eller metanol, som den mobile fasen. Derfor interagerer analyttene med den ikke-polare stasjonære fasen.
Hva er normalfase-HPLC?
HPLC i normal fase er en kromatografisk teknikk der vi bruker en hydrofil stasjonær fase. Det er den tradisjonelle metoden for HPLC, selv om vi ikke bruker den så mye. Den stasjonære fasen er polar, og den mobile fasen er ikke-polar. Enda viktigere er at den mobile fasen av denne teknikken er 100 % organisk. Det betyr at det ikke brukes vann til dette.
Figur 01: En prøveprofil for normalfase- og reversfase-HPLC-kromatogrammer i henhold til polariteten til komponentene i analytten.
Vanligvis inneholder den stasjonære fasen silika, cyano, diol, aminobundne faser osv. Mobile faser inkluderer organiske løsningsmidler som heksan, etylacetat osv. Denne teknikken baserer seg på retensjon av løsemiddel- eller analyttmolekyler på polar stasjonær fase.
Hva er forskjellen mellom omvendt fase og normal fase HPLC?
Reversfase HPLC er en kromatografisk teknikk der vi bruker en hydrofob stasjonær fase. Den stasjonære fasen av denne teknikken er ikke-polar mens den mobile fasen er polar. Videre bruker forskere en vandig blanding av vann med et blandbart, polart organisk løsningsmiddel, slik som acetonitril eller metanol, som den mobile fasen i omvendt fase HPLC. I kontrast er normalfase-HPLC en kromatografisk teknikk der vi bruker en hydrofil stasjonær fase. Den stasjonære fasen av denne teknikken er polar mens den mobile fasen er upolar. I tillegg til det bruker forskere organiske løsningsmidler som heksan, etylacetat, etc. som den mobile fasen av normalfase HPLC. Infografikken nedenfor viser forskjellen mellom omvendt fase og normal fase HPLC i tabellform.
Sammendrag – omvendt fase vs normal fase HPLC
Reversfase og normalfase HPLC-teknikker er to væskekromatografiske teknikker. Hovedforskjellen mellom omvendt fase og normal fase HPLC er at omvendt fase HPLC bruker en ikke-polar stasjonær fase og en polar mobil fase, mens normal fase HPLC bruker en polar stasjonær fase og en mindre polar mobil fase.
