Nøkkelforskjellen mellom RP HPLC og HIC er at RP HPLC bruker en mer polar mobil fase og en mindre polar stasjonær fase. Mens HIC bruker en hydrofob stasjonær fase som lar de hydrofobe molekylene feste seg til den.
Kromatografi er en analytisk teknikk som hjelper til med å skille en blanding i komponentene. Først må vi løse opp prøven som skal separeres i en løsning. Denne løsning-stoffblandingen kalles den mobile fasen. Deretter føres den mobile fasen gjennom et annet materiale som kalles den stasjonære fasen. Den stasjonære fasen bestemmer separasjonen av komponentene. Separasjonen skjer på grunn av delingen av materiale mellom den mobile fasen og den stasjonære fasen.
Hva er RP HPLC?
Begrepet RP HPLC står for Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Det innebærer separasjon av komponenter i en blanding, i henhold til hydrofobicitet. De hydrofobe komponentene i den mobile fasen kobles til de immobiliserte hydrofobe liganden på den stasjonære fasen, mens hydrofile komponenter eluerer gjennom den stasjonære fasen uten å feste seg til overflaten av den stasjonære fasen.
Figur 01: HPLC-apparat
I tillegg har denne metoden større reproduserbarhet sammenlignet med andre kromatografiske teknikker, og den viser også bred anvendelighet. Derfor bruker vi denne metoden i laboratorier for over 75 % av alle HPLC-metoder. Mesteparten av tiden bruker vi en vandig blanding av vann med et blandbart polart organisk løsningsmiddel som mobil fase. Dermed vil det sikre festing av de hydrofobe komponentene i løsningen til overflaten av den stasjonære fasen.
Hva er HIC?
Begrepet HIC står for Hydrophobic Interaction Chromatography. Det er en type omvendt fase HPLC, og denne metoden brukes hovedsakelig for separasjon av store biomolekyler som proteiner. I denne metoden må vi bruke et vandig medium for å lage prøven av biomolekylet. Det er fordi organiske løsemidler kan forårsake denaturering av proteinene. Dessuten bruker denne teknikken interaksjonen mellom store molekyler med en lett hydrofob overflate av den stasjonære fasen. Videre må vi bruke en høy s altkonsentrasjon i prøven fordi det oppmuntrer til at proteinet beholdes på pakningen; denne prosessen kalles uts alting. Ved å redusere s altkonsentrasjonen gradvis, kan vi få biomolekylene til å eluere separat i henhold til deres hydrofobisitet.
Vanligvis bruker denne metoden forholdene som er motsatte av ionebytterkromatografi. I denne teknikken må vi først føre en bufferløsning gjennom kolonnen for å redusere oppløsningen av oppløst stoff i prøven. Det gjør at de hydrofobe områdene av proteinet eksponeres. Men når molekylet er mer hydrofobt, kreves det mindre s alt for å fremme bindingen. Her elueres de mindre hydrofobe løste stoffene først, og i henhold til endringen i s altkonsentrasjon elueres flere hydrofobe oppløste stoffer sist.
Hva er forskjellen mellom RP HPLC og HIC?
Kromatografi er en analytisk teknikk for separering av komponenter i en blanding. RP HPLC og HIC er to spesialiserte kromatografiske teknikker. Hovedforskjellen mellom RP HPLC og HIC er at RP HPLC bruker en mer polar mobil fase og mindre polar stasjonær fase, mens HIC bruker en hydrofob stasjonær fase, som lar de hydrofobe molekylene feste seg til den.
Infografien nedenfor oppsummerer forskjellen mellom RP HPLC og HIC.
Sammendrag – RP HPLC vs. HIC
Kromatografi er en analytisk teknikk for separering av komponenter i en blanding. RP HPLC og HIC er to spesialiserte kromatografiske teknikker. Hovedforskjellen mellom RP HPLC og HIC er at RP HPLC bruker en mer polar mobil fase og en mindre polar stasjonær fase, mens HIC bruker en hydrofob stasjonær fase, som lar de hydrofobe molekylene feste seg til den.
