Nøkkelforskjellen FPLC og HPLC er at FPLC er en type væskekromatografi som renser store biomolekyler som proteiner, nukleotider og peptider, mens HPLC er en type væskekromatografi som skiller forbindelser med liten molekylvekt.
Væskekromatografi er en teknikk som brukes til å separere en prøve i dens individuelle komponenter. Denne separasjonen oppstår på grunn av samspillet mellom spesifikke prøver med mobile og stasjonære faser. Komponenter i en prøve separeres basert på hver komponents affinitet for den mobile fasen i væskekromatografi. Når den mobile fasen og prøven passerer gjennom en kolonne, begynner komponentene i prøven å skille seg i bånd som kan påvises ved UV-VIS-spektroskopi. Derfor er FPLC og HPLC to typer væskekromatografiteknikker.
Hva er FPLC?
FPLC er en type væskekromatografi som renser store biomolekyler som proteiner, nukleotider og peptider. Den raske proteinvæskekromatografien (FPLC) ble først utviklet og markedsført i Sverige av selskapet Pharmacia i 1982. Den brukes ofte til å analysere eller rense proteinblandinger. Dette skjer basert på prinsippet om prøvekomponenters affinitet for flytende væske (mobil fase) og et porøst fast materiale (stasjonær fase). I FPLC er den mobile fasen en buffer, og den stasjonære fasen er en harpiks sammensatt av perler. Den består vanligvis av tverrbundet agarose pakket inn i en sylindrisk glass- eller plastkolonne.
Figur 01: FLPC-apparat (Fast Protein Liquid Chromatography)
I det meste av FLPC-strategien brukes ionebytterharpiks. Derfor vil proteinet av interesse binde seg til harpiksen ved en ladningsinteraksjon. FLPC-teknikken bruker også to buffere: buffer 1 (løpebufferen) og buffer 2 (elueringsbufferen). Til å begynne med, når buffer og prøveblanding kjøres gjennom kolonnen, vil proteinet av interesse i blandingen binde seg til harpiksen ved en ladningsinteraksjon. Men proteinet av interesse blir dissosiert og går tilbake til løsningen i elueringsbuffer når elueringsbufferen går gjennom kolonnen ved slutten av prosessen. Senere går løsningen (elueringsmiddel som inneholder protein av interesse) gjennom to detektorer, som måler s altkonsentrasjon og proteinkonsentrasjon. Ettersom hvert protein elueres, fremstår det som en "topp" under deteksjonen og kan samles opp for videre bruk.
Hva er HPLC?
HPLC er en type væskekromatografi som separerer forbindelser med liten molekylvekt. I 1969 ble den første HPLC-en kommersielt produsert av Waters Corporation, USA. Ved høyytelses væskekromatografi (HPLC) pumpes en prøveblanding (analytt) i et løsemiddel (mobil fase) gjennom en kolonne med kromatografisk pakkemateriale (stasjonær fase) ved høyt trykk. Prøveblandingen bæres av en bevegelig bæregasstrøm av helium eller nitrogen.
Figur 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
Komponentene i prøveblandingen som har minst mengde interaksjon med den stasjonære fasen eller mest mengde interaksjon med den mobile fasen, vil forlate kolonnen raskere. På den annen side vil komponentene i prøveblandingen som har mest mengde interaksjon med den stasjonære fasen eller minst mengde interaksjon med den mobile fasen, forlate kolonnen langsommere. Basert på interaksjonsprinsippet ovenfor kan komponentene i prøveblandingen separeres. Dessuten identifiserer instrumentdetektoren hver komponent i prøveblandingen som kommer ut av kolonnen. HPLC brukes til å inspisere miljø- og biologiske prøver for tilstedeværelse eller fravær av kjente forbindelser, slik som legemidler, giftstoffer eller plantevernmidler. Det brukes i forskjellige bransjer som farmasøytisk, miljø, rettsmedisin og kjemikalier.
Hva er likhetene mellom FPLC og HPLC?
- FPLC og HPLC er typer væskekromatografi.
- Begge brukes til å skille og identifisere biologiske prøver.
- De har en flytende mobil fase og en fast stasjonær fase.
- Begge teknikkene bruker en kolonne for å passere gjennom prøven.
- Disse teknikkene bruker pumper, detektorer, ventiler og programvare for prøveseparasjon og deteksjon.
Hva er forskjellen mellom FPLC og HPLC?
FPLC er en type væskekromatografi som brukes til å rense store biomolekyler som proteiner, nukleotider og peptider. HPLC er en type væskekromatografi som brukes til å separere forbindelser med liten molekylvekt. Så dette er nøkkelforskjellen mellom FPLC og HPLC. Dessuten bruker FPLC pH- og konduktivitetsmonitorer samt brønner som fraksjonssamlere. Derimot bruker ikke HPLC pH- og konduktivitetsmonitorer og fraksjonssamlere.
Infografikken nedenfor viser flere forskjeller mellom FPLC og HPLC i tabellform.
Sammendrag – FPLC vs HPLC
Kromatografi er en laboratorieanalyseteknikk som brukes til å separere komponenter fra en blanding. Den er delt inn i flere typer som kolonnekromatografi, gasskromatografi, væskekromatografi, ionebyttekromatografi, etc. FPLC og HPLC er to typer væskekromatografiteknikker. FPLC er en type væskekromatografi som brukes til å rense store biomolekyler som proteiner, nukleotider og peptider. På den annen side er HPLC en type væskekromatografi som brukes til å skille forbindelser med liten molekylvekt. Dermed er dette oppsummeringen av hva som er forskjellen mellom FPLC og HPLC.
