Nøkkelforskjellen mellom HPLC og rask HPLC er at pumpetrykket som vi bruker for HPLC er rundt 40 MPa, mens pumpetrykket for rask HPLC er rundt 3-5 MPa.
Den vanligste teknikken vi bruker for å separere komponenter i en blanding er "væskekromatografi". Det er flere teknikker for å oppnå dette formålet, og HPLC er veldig populært. HPLC står for High Performance Liquid Chromatography som identifiserer, kvantifiserer og separerer komponenter i en væskeblanding på en rask og effektiv måte. Rask HPLC er en spesiell applikasjon av HPLC som i det siste har fanget oppmerksomheten til de involverte i studiet av løsninger.
Hva er HPLC?
HPLC er væskekromatografi med høy ytelse. Den bruker et høyt trykk for å presse løsemidler slik at de passerer gjennom en kolonne. Det er også en ideell måte å separere og studere ulike forbindelser som aminosyrer, nukleinsyrer, karbohydrater, steroider, antibiotika og hydrokarboner. HPLC har mange fordeler i forhold til andre metoder for separering av blandinger som høyere oppløsning og raskere analyse. Det fjerner behovet for ompakking og regenerering og gir bedre kontroll over parametere og øker dermed effektiviteten av separasjonen. Ideelt sett egner HPLC seg for store applikasjoner siden den kan separere svært små partikler og tillater bruk av høye trykk som gjør det lett for løsemidler å flyte lett.
Figur 01: HPLC-kolonne
I korte trekk er operasjonsmetoden for HPLC-teknikken som følger. Først bør vi introdusere prøven i strømmen av mobil fase i diskrete små mengder ved hjelp av en pumpe. Pumpetrykket bør holdes på 40 MPa. Denne strømmen av mobil fase siver gjennom kolonnen til HPLC. Deretter passerer også komponentene i prøven gjennom kolonnen. Imidlertid er bevegelseshastighetene deres forskjellige fra hverandre på grunn av forskjellen i interaksjonene mellom prøvekomponentene og adsorbenten inne i kolonnen. Vi kaller denne adsorbenten som den stasjonære fasen fordi den ligger inne i kolonnen (ikke i bevegelse). Så, på slutten av kolonnen, kan vi samle prøven som eluerer fra kolonnen, og dermed kan vi samle komponentene i prøven separat.
Hva er rask HPLC?
Nylig utviklet forskere ved Schering Plough-forskningsinstituttet en rask HPLC-teknikk som er en avansert versjon av HPLC ettersom den muliggjør enda raskere separasjon av forbindelser fra en blanding. Også kjent som rask HPLC, benytter denne teknikken en 2,7 um smeltet kjerne silikapartikler som er laget ved å smelte 0,5 um porøs silika over en fast silikapartikkel. Disse unikt lagde partiklene gjør separasjonsprosedyren veldig rask og det også ved lavt mottrykk enn det vi bruker i HPLC.
Figur 02: FPLC-apparat
Rask HPLC får resultater som kan sammenlignes med UPLC, men forskere mener at denne teknikken er overlegen siden den ikke krever veldig dyrt ultrahøytrykksutstyr. Det som er bra er at rask HPLC ikke krever noen nye laboratorieprotokoller.
Hva er forskjellen mellom HPLC og Fast HPLC?
HPLC er høyytelses væskekromatografi og rask HPLC er en avansert form for høyytelses væskekromatografi. Hovedforskjellen mellom HPLC og rask HPLC er at pumpetrykket som vi bruker for HPLC er rundt 40 MPa. Mens pumpetrykket for rask HPLC er rundt 3-5 MPa. Videre kan vi separere forskjellige forbindelser som aminosyrer, nukleinsyrer, karbohydrater, steroider, antibiotika og hydrokarboner ved hjelp av HPLC-teknikken mens den raske HPLC-teknikken hovedsakelig brukes til separering av proteiner.
Infografikken nedenfor gir mer informasjon om forskjellen mellom HPLC og rask HPLC.
Sammendrag – HPLC vs Fast HPLC
HPLC er en teknikk for væskekromatografi som har blitt veldig populær over hele verden. Fast HPLC er en ny versjon av HPLC, forskere ved Schering Plough Institute utviklet denne nye teknikken. Hovedforskjellen mellom HPLC og rask HPLC ligger på pumpetrykket som vi bruker for separasjonen. Det er; pumpetrykket som vi bruker for HPLC er rundt 40 MPa. Men pumpetrykket for rask HPLC er rundt 3-5 MPa.
