Nøkkelforskjellen mellom HPLC og UPLC er at HPLC tillater analyse av partikler med størrelsen rundt 5 mikrometer, mens UPLC tillater mye mindre partikler rundt 2 mikrometer.
HPLC og UPLC er begge væskekromatografiske teknikker som er nyttige for å skille komponentene i en forbindelse. For å vite forskjellen mellom HPLC og UPLC, må vi først vite hva HPLC er. Dette er fordi UPLC er en spesiell versjon av HPLC og vi kan lett forstå den hvis vi vet hva HPLC er.
Hva er HPLC?
Begrepet HPLC står for High Performance Liquid Chromatography. Det er en teknikk som vi kan bruke for å skille forskjellige bestanddeler av en forbindelse. Det er også den mest brukte teknikken for å identifisere, kvantifisere og separere komponenter i en blanding. Dessuten bruker denne teknikken et høyt trykk for å skyve løsemidler gjennom kolonnen. Videre er de viktigste bruksområdene for HPLC i biokjemi for analyse av bestanddeler i en forbindelse. Det er en ideell måte for separasjon og identifikasjon av aminosyrer, nukleinsyrer, proteiner, hydrokarboner, plantevernmidler, karbohydrater, antibiotika, steroider og utallige andre uorganiske stoffer.
Figur 01: HPLC-system i et laboratorium
I korte trekk er operasjonsmetoden for HPLC-teknikken som følger. For det første bør vi introdusere prøven i strømmen av mobil fase i diskrete små mengder ved hjelp av en pumpe. Pumpetrykket bør holdes på 40 MPa. Deretter siver denne strømmen av mobil fase gjennom kolonnen til HPLC. Komponentene i prøven passerer også gjennom kolonnen. Imidlertid er bevegelseshastighetene deres forskjellige fra hverandre. Denne forskjellen oppstår på grunn av forskjellen i interaksjonene mellom prøvekomponentene og adsorbenten inne i kolonnen. Vi kaller denne adsorbenten som den stasjonære fasen fordi den ligger inne i kolonnen (ikke i bevegelse). For det andre, på slutten av kolonnen, kan vi samle prøven som eluerer fra kolonnen. Der kan vi bestemme forskjellene i oppbevaringstider for hver komponent i prøven.
Hva er UPLC?
Begrepet UPLC står for Ultra High-Performance Liquid Chromatography. Det er en variant av HPLC, men operasjonsmetoden er den samme. I motsetning til HPLC tillater denne metoden imidlertid å analysere svært små partikler, for eksempel 2 mikrometer små partikler.
Figur 02: En UPLC-enhet
I tillegg gir det en raskere analyse. I denne teknikken bruker vi et 100 MPa pumpetrykk for innføring av prøven i kolonnen. Derfor bekrefter dette høye trykket at hele prøven er innført i kolonnen. Dermed er dette veldig effektivt sammenlignet med HPLC.
Hva er forskjellen mellom HPLC og UPLC?
Begrepet HPLC står for High Performance Liquid Chromatography, mens begrepet UPLC står for Ultra High Performance Liquid Chromatography. Derfor er UPLC-teknikken en utviklet versjon av HPLC. Dermed er operasjonsmetoden den samme for begge teknikkene. Imidlertid er UPLC mer effektiv sammenlignet med HPLC fordi den bruker et høyt pumpetrykk; pumpetrykket for HPLC er 40 MPA mens det er 100 MPa for UPLC. Derfor er dette en forskjell mellom HPLC og UPLC. Fremfor alt er hovedforskjellen mellom HPLC og UPLC at HPLC tillater analyse av partikler med størrelse rundt 5 mikrometer, mens UPLC tillater mye mindre partikler rundt 2 mikrometer.
Sammendrag – HPLC vs UPLC
UPLC er en form for HPLC. Dermed er operasjonsmetodene de samme. Men vi kan finne noen forbedrede funksjoner i UPLC sammenlignet med HPLC. Derfor er det en viss forskjell mellom HPLC og UPLC. Den viktigste forskjellen mellom HPLC og UPLC er imidlertid at HPLC tillater analyse av partikler med størrelse rundt 5 mikrometer, mens UPLC tillater mye mindre partikler rundt 2 mikrometer.
