Nøkkelforskjell – Forover vs Reverse Primer
Polymerase kjedereaksjon (PCR) er en DNA-amplifikasjonsmetode som brukes i molekylærbiologiske applikasjoner. Det er en ofte brukt teknikk som lager millioner til milliarder av kopier av en spesielt interessert DNA-sekvens. Det er en in vitro-metode utført i laboratorier. PCR-teknikken er helt avhengig av den kommersielt produserte DNA-polymerasen k alt Taq-polymerase. Og det krever også flere andre komponenter og riktig temperaturvedlikehold. En viktig komponent er primere. Primere er de korte DNA-sekvensene som er spesielt designet for mål-DNA-sekvensen. De er vanligvis rundt 20 nukleotider lange. Taq-polymerase katalyserer tilsetningen av nukleotider til eksisterende nukleotidsekvens. Derfor blir primere tjent som utgangspunkt for syntesen av nye tråder. Taq-polymerase fungerer bare i 5' til 3' retning, og DNA-syntesen skjer derfor i samme 5' til 3' retning. Siden DNA er dobbelttrådet, trengs to typer primere i PCR. De er kjent som forward primer og reverse primer. Forover- og reversprimere kalles basert på retningen for forlengelsen av primeren i DNA når DNA-syntese skjer. Forward primer annealer med antisense DNA-tråden og initierer syntesen av +ve-strengen av genet i 5' til 3' retning. Revers primer annealer med sense-tråden og initierer syntesen av den komplementære tråden til den kodende tråden; som er -ve strengen til genet i 5' til 3' retning. Dette er hovedforskjellen mellom forover- og bakover-primere.
Hva er en Forward Primer?
Foroverorientering er syntesen av den kodende tråden eller sense-strengen til et gen. Taq polymerase katalyserer syntesen av en ny tråd i 5' til 3' retning. Syntesen av kodende tråd skjer når primeren annealer med den ikke-kodende eller antisense tråden og forlenges i 5' til 3' retning.
Figur 01: Forover- og bakoverprimere
Primeren som annealer med antisense-tråden eller den ikke-kodende tråden eller template-tråden er kjent som forward primer siden forward primer fungerer som et utgangspunkt for syntesen av koding eller den positive tråden til genet. Forward primer har en kort nukleotidsekvens som er komplementær til den 3' flankerende enden av antisense-tråden. Den hybridiserer med antisense-tråden og letter Taq-polymerasen til å legge til nukleotider som er komplementære til m altråden.
Hva er en omvendt primer?
Revers primer er den korte DNA-sekvensen som annealer med 3'-enden av sense-tråden eller den kodende tråden. Revers primer tjener som utgangspunkt for å syntetisere en komplementær tråd av den kodende sekvensen eller den ikke-kodende sekvensen. Omvendt primer er designet komplementært til 3'-enden av kodingsstrengen. Derfor annealser den med den flankerende 3'-enden av den kodende tråden og lar Taq-polymerase syntetisere antisense-tråden eller malstrengen. Siden orienteringen er på en omvendt måte, er denne primeren merket som revers primer.
Både bakover- og fremoverprimere er viktige for produksjon av millioner til milliarder av kopier av bestemte DNA-regioner som er målrettet eller interessert.
Hva er likhetene mellom Forward og Reverse Primer?
- Både Forward- og Reverse-primere er laget av oligonukleotider.
- Både frem- og bakoverprimere har kort nukleotidsekvens komplementær til de flankerende endene av DNA-dobbeltstrengene.
- Både Forward- og Reverse-primere består vanligvis av 20 nukleotider.
- Både forover- og bakoverprimere brukes i polymerasekjedereaksjoner.
- Både forover- og bakoverprimere syntetiseres kommersielt.
- Både forover- og bakoverprimere er temperaturstabile, og de har norm alt lignende Tm.
- Både forover- og bakoverprimere anneales med mål-DNA-sekvensene.
- Både forover- og bakoverprimere er utformet i henhold til PCR-reaksjonene.
- Både forover- og bakoverprimere brukes som utgangspunkt for DNA-amplifikasjonen.
- Både bakover- og fremoverprimere er viktige for produksjon av millioner kopier av bestemte regioner med målrettede eller interesserte DNA-sekvenser.
Hva er forskjellen mellom Forward og Reverse Primer?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Forward primer er den korte DNA-sekvensen som hybridiserer med 3'-enden av det ikke-kodende eller templattråden til genet og tjener som utgangspunkt for å syntetisere den kodende sekvensen. | Revers primer er den korte DNA-sekvensen som hybridiserer med 3'-enden av den kodende eller ikke-template-tråden og tjener som utgangspunkt for å syntetisere den ikke-kodende sekvensen. |
| Annealing Strand | |
| Forover primer gløder med malstreng. | Revers primer-gløder med den ikke-malstrengen. |
| Resulterende ny sekvens | |
| Foroverprimer letter syntesen av kodingssekvensen. | Revers primer letter syntesen av den ikke-kodende sekvensen. |
Summary – Forward vs Reverse Primer
Det er to typer primere involvert i PCR-teknikk. De er forover og bakover primere. Basert på forlengelsen av primeren i ny DNA-strengsyntese, blir disse primerne merket eller navngitt. Taq polymerase syntetiserer det nye DNA i 5' til 3' orientering. Derfor er primere designet som komplementære til 3'-ender av de doble strengene. Foroverprimer som forlenges i 5' til 3' retning hybridiserer med 3'-enden av antisensen eller malen eller den ikke-kodende sekvensen. Det fungerer som utgangspunktet for å syntetisere kodesekvens. Omvendt primer som forlenges i 5' til 3'-retning hybridiserer med 3'-enden av kodingen eller ikke-malen eller sense-strengen. Det tjener som utgangspunkt for å syntetisere den ikke-kodende sekvensen. Dette er forskjellen mellom forover og bakover primer.
