Nøkkelforskjell – Gramfarging vs Acid Fast
Bakterier er veldig små mikroorganismer. De er gjennomsiktige, og det er vanskelig å oppdage dem under levende og ufargede forhold. Det er derfor utviklet ulike fargingsmetoder for å lette påvisning av bakterier. Det er tre hovedtyper av fargingsteknikker: enkel farging, differensiell farging og strukturell farging. Differensiell farging er en teknikk som bruker mer enn én farging for å differensiere bakterier. Grambeis og syrefast beis er mest populært kjent som differensialbeis. Gramfarging er en differensialfargingsteknikk, som skiller bakterier i to grupper kjent som Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier. Den syrefaste flekken er en differensialflekk som brukes til å identifisere syrefaste organismer som Mycobacterium fra ikke-syrefaste organismer. Dette er hovedforskjellen mellom Gram-beis og Acid Fast-beis.
Hva er Gram Stain?
Gramfarging er en viktig differensialfargingsteknikk som brukes for bakteriell identifikasjon i mikrobiologi. Denne teknikken ble introdusert av den danske bakteriologen Hans Christian Gram i 1884. Gramfarging kategoriserer bakterier i to hovedgrupper k alt grampositive og gramnegative, som er svært viktige i bakterieklassifisering og identifikasjon. Mikrobiologer utfører gramfarging som et første trinn i bakteriell karakterisering under studiene.
Bakterier er gruppert basert på forskjellene i celleveggen deres. Gram-positive bakterier er sammensatt av et tykt peptidoglykanlag i celleveggen, mens gramnegative bakterier er sammensatt av et tynt peptidoglykanlag i celleveggen. Resultatet av gramfargingen vil være basert på forskjellen i tykkelsen på peptidoglykanlaget i celleveggen.
Grams-farging utføres ved å bruke fire forskjellige reagenser, nemlig; primærbeis, beisemiddel, avfargingsmiddel og motbeis. Krystallfiolett og safranin brukes som henholdsvis primær- og motflekker, mens gram jod og 95 % alkohol brukes som henholdsvis beisemiddel og avfargingsmiddel. De grunnleggende trinnene for gramfarging er som følger;
- Et bakterieutstryk tilberedes på et rent glassglass, varmefiksert og avkjølt.
- Utstryk er oversvømmet med krystallfiolett i 1 – 2 minutter.
- Utstryk skylles med sakte rennende vann fra springen for å fjerne overflødige flekker.
- Gram jod påføres smøret i 1 minutt.
- Utstryk skylles med sakte rennende vann fra springen
- Smear vaskes med 95 % alkohol i 2 – 5 sekunder og skylles med sakte rennende vann fra springen.
- Utstryk er motflekket med safranin i 1 minutt
- Utstryk skylles med sakte rennende vann fra springen, tørkes og observeres under mikroskop.
På slutten av gram-flekken vil gram-negative bakterier bli observert i rosa, mens gram-positive bakterier vil bli observert i lilla farge.
Figur 01: Gramnegative og grampositive bakterier
Utfallet av gram-flekken bestemmes av tykkelsen på peptidoglykanlaget i celleveggen. Under avfargingstrinnet fjernes primærflekken og beisemidlet lett fra de gramnegative bakteriene og blir fargeløse siden de har et tynt peptidoglykanlag. Den primære flekken beholdes i de grampositive bakteriene siden de har et tykt peptidoglykanlag. Motflekken vil ikke være effektiv for grampositive bakterier på grunn av retensjon av primærflekken. Dermed vil grampositive bakterier være synlige i primærfarge, det vil si lilla farge. Motflekken vil farge de gramnegative bakteriene, og de vil være synlige i plukkfargen, som er safraninfargen. Derfor er det lett å kategorisere bakterier i to grupper etter gramfarging, og det er verdifullt for bakteriell differensiering og identifikasjon.
Hva er syrefast?
Syrefasthet er en fysisk egenskap hos visse bakterier, spesielt deres motstand mot avfarging av syrer under fargingsprosedyrer. Når de er farget, motstår disse organismene fortynnede syre- og/eller etanolbaserte avfargingsprosedyrer som er vanlige i mange fargingsprotokoller. Derfor er navnet "syrefast" gitt til disse organismene. Denne egenskapen vises på grunn av å ha et høyt nivå av voksaktig materiale (mykolsyrer) i celleveggene. Denne testen er kritisk for identifisering av Mycobacterium tuberculosis.
Figur 2: Syrefaste mykobakterier
Denne syrefaste flekken ble utviklet av Paul Ehrlich i 1882. Ehrlichs syrefaste teknikk ble modifisert av Ziehl-Neelsen, og den brukes nå oftere. Syrefast farging involverer tre forskjellige reagenser. Carbol fuschin brukes som den primære beisen. Sur alkohol brukes som avfargingsmiddel. Metylenblått brukes som motbeis. Fargingsprosedyren utføres som følger.
- Den primære flekken (carbol fuchsin) påføres den faste prøven på objektglasset (Alle celler vil bli farget i rød farge).
- Sliden varmes opp ved damping i 5 minutter, noe som driver flekkene skikkelig inn i cellene.
- Deretter tilsettes avfargingsløsningen (Dette fjerner det røde fargestoffet fra alle celler unntatt de syrefaste bakteriene).
- Metylenblått tilsettes som en motbeis (den farger alle avfargede bakterieceller).
- Syrefaste bakterier forblir røde mens ikke-syrefaste bakterier farges i blått.
Hva er likhetene mellom Gram Stain og Acid Fast?
- Gramfarging og syrefast er to differensielle fargingsteknikker.
- Begge teknikkene kategoriserer bakterier i to grupper.
- Begge teknikkene bruker to flekker og en avfarging.
Hva er forskjellen mellom Gram Stain og Acid Fast?
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gram-farging er en differensialfargingsteknikk som skiller bakterier i to grupper Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier. | Acid Fast stain er en differensialfarge som brukes til å identifisere syrefaste organismer fra ikke-syrefaste organismer. |
| Primærbeis | |
| Krystallfiolett er den mest brukte primærbeisen i gramfarging. | Carbol fuchsin er den primære flekken som brukes i syrefast. |
| Fargemiddel | |
| 95 % alkohol brukes som avfargingsmiddel i grambeis. | Acid alkohol brukes som et avfargingsmiddel i syrefast. |
| Counter Stain | |
| Gram beis bruker safranin som motflekk. | Acid fast beis bruker metylenblått som motflekk. |
| Observation | |
| Gram-negative bakterier er observert i plukkefarge og gram-positive bakterier er observert i lilla farge. | Acid Fast-bakterier er observert i rød farge og ikke-syrefaste bakterier er observert i blå farge. |
Sammendrag – Gram Stain vs Acid Fast
Visualisering av mikroorganismer i levende tilstand er vanskelig. Derfor brukes biologiske flekker og fargingsprosedyrer mye for å studere egenskapene deres. Differensiell farging er en type fargingsteknikk som brukes for å differensiere bakterier. Grambeis og syrefast beis er to differensielle fargingsteknikker. Gramfarging skiller gramnegative bakterier og grampositive bakterier basert på tykkelsen på celleveggene deres. Syrefast farging skiller syrefaste bakterier fra ikke-syrefaste bakterier basert på mykolsyreinnholdet i celleveggen. Dette er forskjellen mellom syrefast og gramflekk.
Last ned PDF-versjon av Gram Stain vs Acid Fast
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til offline-formål i henhold til sitat. Last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom Gram Stain og Acid Fast.
