Key Difference – Gram Stain vs Culture
Gramfarging er en fargeteknikk som utføres for å differensiere bakterier i to grupper i henhold til tykkelsen på peptidoglykanlaget i celleveggen. Kultur er en metode for å dyrke og vedlikeholde mikroorganismer under laboratorieforhold for forskjellige analyser. Nøkkelforskjellen mellom gramflekk og kultur er deres funksjon; gram-stamme en fargingsteknikk av bakterier der kultur er en metode for å dyrke og vedlikeholde mikroorganismer.
Hva er Gram Stain?
Gramfarging er en viktig differensialfargingsteknikk som brukes for bakteriell identifikasjon i mikrobiologi. Denne teknikken ble introdusert av den danske bakteriologen Hans Christian Gram i 1884. Gramfarging kategoriserer bakterier i to hovedgrupper: grampositive og gramnegative; disse er svært viktige i bakterieklassifisering og identifikasjon. Gramfarging utføres som et første trinn for bakteriell karakterisering.
Bakterier er gruppert basert på forskjellene i celleveggen deres. Grampositive bakterier inneholder et tykt peptidoglykanlag i celleveggen, mens gramnegative bakterier inneholder et tynt peptidoglykanlag i celleveggen som vist i figur 01. Utfallet av gramfargingen vil være basert på tykkelsesforskjellen i peptidoglykanlaget til cellevegg.
Figur 1: Gram-positive bakterier og gramnegative bakterier
Grams-farging utføres ved å bruke fire forskjellige reagenser, nemlig; primærbeis, beisemiddel, avfargingsmiddel og motbeis. Krystallfiolett og safranin fungerer som henholdsvis primær- og motflekker, mens gram jod og 95 % alkohol fungerer som henholdsvis beisemiddel og avfarging.
Basic Steps of Grams Stain
- Et bakterieutstryk tilberedes på et rent glassglass, varmefiksert og avkjølt.
- Utstryk er oversvømmet med krystallfiolett i 1 – 2 minutter.
- Utstryk skylles med sakte rennende vann fra springen for å fjerne overflødige flekker.
- Gram jod påføres smøret i 1 minutt.
- Utstryk skylles med sakte rennende vann fra springen
- Smear vaskes med 95 % alkohol i 2 – 5 sekunder og skylles med sakte rennende vann fra springen.
- Utstryk er motflekket med safranin i 1 minutt
- Utstryk skylles med sakte rennende vann fra springen, tørkes og observeres under mikroskop.
På slutten av gram-flekken vil gram-negative bakterier bli observert i rosa, mens gram-positive bakterier vil bli observert i lilla farge som vist i figur 02. Utfallet av gram-flekken bestemmes av tykkelsen av peptidoglykanlaget i celleveggen deres. Under avfargingstrinnet fjernes primærflekken og beisemidlet lett fra de gramnegative bakteriene og blir fargeløse siden de har et tynt peptidoglykanlag. Den primære flekken beholdes i de grampositive bakteriene siden de har et tykt peptidoglykanlag. Motfarging vil ikke være effektiv for grampositive bakterier på grunn av retensjon av primærflekken. Så grampositive bakterier vil være synlige i primærfarge, dvs. lilla farge. Motflekker vil farge de gramnegative bakteriene og vil være synlige i plukkfargen som er safraninfargen. Derfor er det lett å kategorisere bakterier i to grupper etter gram-flekken, og det er verdifullt i bakteriell differensiering og identifikasjon.
Figur 2: Gram-stamme
Hva er kultur?
Mikrobiell kultur er en metode for å dyrke og vedlikeholde mikroorganismer under laboratorieforhold for ulike formål. Kulturer dyrkes i faste, halvfaste og flytende medier basert på typen og formålet med mikroorganismens dyrking. Kulturer er utstyrt med nødvendige næringsstoffer og vekstbetingelser som kreves av mikroorganismene. Det er forskjellige komponenter i et kulturmedium som energikilde, karbonkilde, nitrogenkilde, mineraler, mikronæringsstoffer, vann, størkningsmiddel osv. Optimal temperatur, oksygen og pH bør justeres i henhold til typen mikroorganisme som dyrkes.
Det finnes forskjellige typer mikrobielle kulturer; for eksempel batchkultur, kontinuerlig kultur, stikkkultur, agarplatekultur, buljongkultur, etc. I henhold til sammensetningen av vekstmediet er det forskjellige typer kulturmedier kjent som syntetiske medier, semisyntetiske medier og naturlige medier. Mikrobielle kulturer tilberedes under sterile forhold inne i et spesielt kammer k alt laminær luftstrøm. Voksemediet og glassvarene steriliseres før inokulering av den ønskede mikroorganismen. Under riktige sterile forhold overføres målmikroorganismen til det steriliserte næringsmediet og inkuberes ved optimal temperatur. Inne i mediet vil mikroorganismen vokse og formere seg ved å bruke de tilførte næringsstoffene.
Figur 3: En bakteriekultur på plate
Hva er forskjellen mellom Gram Stain og Culture?
Gram Stain vs Culture |
|
| Grams-stamme er en differensialfargingsteknikk som brukes til bakteriell differensiering og identifikasjon. | Mikrobiell kultur er en metode for å dyrke mikroorganismer i laboratoriet. |
| Components | |
| Dette bruker forskjellige reagenser, inkludert to flekker. | Dette bruker forskjellige kulturmedier som faste, halvfaste og flytende medier sammensatt av næringsstoffer og andre nødvendige forhold. |
| Grunnleggende funksjoner | |
| Dette tillater gruppering av bakterier i to grupper: gramnegative og grampositive. | Dette tillater multiplikasjon av mikroorganismer for forskjellige formål. |
| Base | |
| Gramfargingsresultatet er basert på forskjellene i peptidoglykanlaget i celleveggen. | Mikroorganismer vil vokse og formere seg inne i kulturmediet. |
| Utfall | |
| Gram-negative bakterier er synlige i rosa farge og gram-positive bakterier er synlige i lilla farge. | På tallerkener kan man se kolonier av mikroorganismene. På flytende medier er mikroorganismer i suspendert form. |
Summary – Gram Stain vs Culture
Mikrobielle kulturer tilberedes og vedlikeholdes under laboratorieforhold for ulike formål som lagring, testing, kjemisk rensing osv. Gramfarging er en fargingsprosedyre som skiller bakterier inn i to hovedgrupper k alt gramnegative bakterier og grampositive bakterier. Derfor er forskjellen mellom gram-flekken og kulturen at gram-farging er en fargingsteknikk av bakterier mens kulturen er en metode for å dyrke og vedlikeholde mikroorganismer i laboratoriene.
