Nøkkelforskjellen mellom Bradford- og Lowry-proteinanalysen er at Bradford-proteinanalysen er basert på absorbansskiftet til fargestoffet Coomassie brilliant blue G-250, mens Lowry-proteinanalysen er basert på reaksjonen av kobberioner (Cu+)-ioner produsert ved oksidasjon av peptidbindinger med Folin–Cioc alteu-reagens.
En analyse er en analytisk teknikk som hjelper til med å karakterisere de viktigste funksjonelle komponentene i en prøve. Derfor kan en analyse enten være en kvalitativ eller kvantitativ test. Mange felt inkludert laboratoriemedisin, farmakologi, miljøbiologi, molekylærbiologi, biokjemi og immunologi bruker denne typen analyser rutinemessig. Bradford og Lowry proteinanalyse er to biokjemiske analyser som bestemmer proteinkonsentrasjonen i en prøveløsning. Begge analysene bruker kolorimetriske teknikker for å gi resultater.
Hva er Bradford Protein Assay?
Bradford proteinanalyse er en rask spektroskopisk analytisk prosedyre for proteinanalyse. Den viser høy nøyaktighet når man måler proteinkonsentrasjonen i en løsning. Marion Bradford introduserte denne prosedyren i 1976. I denne analysen er den totale reaksjonen basert på aminosyresammensetningen til de målte proteinene. Med andre ord er Bradford proteinanalyse en kolorimetrisk analyse. Den bruker fargestoffet Coomassie brilliant blue. Derfor avhenger denne kolorimetriske proteinanalysen av absorbansskiftet til fargestoffet. Coomassie brilliant blue G-250 finnes i tre formater: kationisk (rød), anionisk (blå) og nøytral (grønn). Under sure forhold blir den røde formen av fargestoffet omdannet til blått. Det bekrefter bindingen av proteinet. Hvis proteinet ikke er tilstede, kan løsningen forbli i brun farge.
Figur 01: Bradford-proteinanalyse
Bradford proteinanalyse skiller seg fra andre proteinanalyser siden den er mindre utsatt for interferens fra ulike kjemiske forbindelser som er tilstede i proteinløsningen. Disse forbindelsene inkluderer natrium, kalium, glukose og sukrose osv.
Hva er Lowry Protein Assay?
Lowry proteinanalyse er en biokjemisk analyse som brukes til å bestemme det totale nivået av protein i en løsning. Oliver H. Lowry er personen som utviklet dette reagenset i 1940. Prosedyren viser den totale proteinkonsentrasjonen i løsningen ved en fargeendring som er proporsjonal med proteinkonsentrasjonen i løsningen. Derfor er dette også en kolorimetrisk proteinanalyse.
Reaksjonen mellom kobberioner (Cu+) produsert ved oksidasjon av peptidbindinger og Folin-Cioc alteu-reagens er grunnlaget for denne prosedyren. Dette reagenset inneholder også fosfomolybdinsyre og fosfor-wolframsyre. Imidlertid er reaksjonsmekanismen til Lowry-proteinanalysen ikke godt forstått. Men det involverer oksidasjon av cystein-, tryptofan- og tyrosinrester ved reduksjon av Folin–Cioc alteu-reagens.
Figur 02: Lowry-proteinanalyse
Cysteinrestene bidrar til absorbansen observert i Lowry-proteinanalysen, og reaksjonen resulterer i et strålende blått molekyl; heteropoly molybdenblått. Reduksjonen av dette molekylet måles ved absorbans ved 660 nm. Konsentrasjonen av cystein- og tryptofanrester som reduserte Folin-Cioc alteu-reagenset utleder derfor den totale konsentrasjonen av proteinet i løsningen.
Hva er likhetene mellom Bradford og Lowry Protein Assay?
- Bradford og Lowry proteinanalyser bestemmer proteinkonsentrasjonen i en løsning.
- Begge metodene er kolorimetriske metoder.
- Følsomheten til begge metodene er også høy.
Hva er forskjellen mellom Bradford og Lowry Protein Assay?
Bradford og Lowry proteinanalyse er to typer analyser som bestemmer proteinkonsentrasjonen i en løsning. Bradford-proteinanalysen er avhengig av absorbansskiftet til fargestoffet Coomassie brilliant blue G-250, mens Lowry-proteinanalysen avhenger av reaksjonen av kobberioner produsert ved oksidasjon av peptidbindinger, med Folin-Cioc alteu-reagens. Så dette er nøkkelforskjellen mellom Bradford og Lowry proteinanalyse. Bradford proteinanalyse tar 15 minutter å produsere et resultat, mens Lowery proteinanalyse tar 40-60 minutter å produsere et resultat. Dermed er dette en annen forskjell mellom Bradford og Lowry proteinanalyse. Videre er Bradford-proteinanalysen avhengig av aminosyresammensetningen mens Lowry-proteinanalysen er delvis avhengig av aminosyresammensetningen. Derfor er dette også en forskjell mellom Bradford og Lowry proteinanalyse.
Inforaphic nedenfor gir flere detaljer om forskjellen mellom Bradford og Lowry proteinanalyse.
Sammendrag – Bradford vs Lowry Protein Assay
En analyse er en analytisk teknikk som brukes til å karakterisere den viktigste funksjonelle komponenten i en prøve. Bradford og Lowry proteinanalyse er to typer proteinanalyser som fungerer under kolorimetriske teknikker. Både Bradford og Lowry proteinanalyser bestemmer proteinkonsentrasjonen i en løsning. Imidlertid ligger hovedforskjellen mellom Bradford og Lowry Protein Assay på den kolorimetriske teknikken de bruker. Bradford-proteinanalysen bruker Coomassie brilliant blue G-250, mens Lowry-proteinanalysen bruker kobberioner (Cu+)-ioner og Folin-Cioc alteu-reagens. Videre gir Bradford-metoden raske resultater enn Lowry-proteinanalysen. Begge metodene er imidlertid svært sensitive metoder og er utsatt for forstyrrelser fra ulike stoffer.
