Nøkkelforskjellen mellom BCA- og Bradford-analysen er at BCA-analysen er tidkrevende og mindre nøyaktig, mens Bradford-analysen er rask og nøyaktig.
BCA og Bradford-analyse er to analysemetoder for bestemmelse av proteinkonsentrasjon. Disse to analysene har forskjellige analyseprinsipper og forskjeller i deres nøyaktighet.
Hva er BCA-analyse?
BCA-analyse eller bicinchoninsyre-analyse er en biokjemisk analyse som er nyttig for å bestemme den totale konsentrasjonen av protein i en løsning. Denne metoden er også oppk alt som Smith-analyse etter oppfinneren, Paul K. Smith. Denne analysemetoden viser likheter med Lowry-proteinanalyse, Bradford-proteinanalyse eller biuretreagens. Vi kan observere den totale proteinkonsentrasjonen i en gitt prøve gjennom en fargeendring av prøveløsningen, som går fra grønt til lilla. Denne fargeendringen skjer proporsjon alt med proteininnholdet. Deretter kan vi bruke en kolorimetrisk teknikk for å analysere fargeintensiteten og proteininnholdet i prøven.
BCA-metode for proteinestimering
Når man vurderer mekanismen til BCA-analysen, inneholder den typiske BCA-løsningen en svært alkalisk løsning med en pH på nesten 11,25, og ingrediensene i denne løsningen inkluderer bicinchoninsyre, natriumkarbonat, natriumbikarbonat, natriumtartrat og kobber(II)sulfatpentahydrat. Denne analysen avhenger først og fremst av to kjemiske reaksjoner: reduksjon av kobber(II) til kobber(I) av peptidbindingene i protein og chelering av to molekyler bicinchoninsyre med kobber(I)-ion, noe som resulterer i et lillafarget kompleks som kan absorberer lys ved 562 nm bølgelengde. I den første reaksjonen er mengden kobber(II) redusert med peptidbindinger proporsjonal med mengden protein i prøven.
Hva er Bradford Assay?
Bradford-analyse er en spektroskopisk analysemetode som er nyttig for å måle konsentrasjonen av protein i en løsning. Denne metoden ble utviklet av Marion M. Bradford i 1976, og det er en relativt rask og nøyaktig metode.
Fargereaksjon av protein og Bradford-reagens
Vi kan bruke denne metoden til å bestemme konsentrasjonen av proteinmengden i en prøve. Den kjemiske reaksjonen som finner sted i prøven under denne analysen er utelukkende avhengig av aminosyresammensetningen til proteinet i prøven.
Bradford Method of Protein Estimation
Når man vurderer metoden for denne analysen, er det en kolorimetrisk proteinanalyse som er basert på absorbansforskyvningen til fargestoffet k alt Coomassie Brilliant Blue G-250. Generelt finnes dette fargestoffet i tre former som anionisk (blå) form, nøytral (grønn) form og kationisk (rød) form. Derfor, under sure forhold, endrer fargestoffet sin farge fra rødt til blått. Dette er på grunn av bindingen av proteinet med fargestoffet. Derimot, hvis det ikke er noe protein å binde med fargestoffet, vises ikke fargeendringen, løsningen får en rødbrun farge. Dette fargestoffet er i stand til å danne et sterkt, ikke-kovalent kompleks med karboksylgruppen til proteinet gjennom Van der Waal-krefter og elektrostatiske attraksjoner.
Hva er forskjellen mellom BCA og Bradford Assay?
BCA og Bradford-analyse er to analysemetoder for bestemmelse av proteinkonsentrasjon. Disse to analysene har forskjellige analyseprinsipper og forskjeller i deres nøyaktighet. Hovedforskjellen mellom BCA og Bradford-analysen er at BCA-analysen er tidkrevende og mindre nøyaktig, mens Bradford-analysen er rask og nøyaktig.
Følgende infografikk oppsummerer forskjellene mellom BCA- og Bradford-analysen i tabellform.
Sammendrag – BCA vs Bradford Assay
BCA-analyse eller bicinchoninsyre-analyse er en biokjemisk analyse som er nyttig for å bestemme den totale konsentrasjonen av protein i en løsning. Bradford-analyse er en spektroskopisk analysemetode som er nyttig for å måle konsentrasjonen av protein i en løsning. Hovedforskjellen mellom BCA og Bradford-analysen er at BCA er tidkrevende og mindre nøyaktig, mens Bradford-analysen er rask og nøyaktig.
