Nøkkelforskjellen mellom gjær en hybrid og gjær to hybrid er at gjær en hybrid er en in vitro-basert analyse for å analysere DNA-protein-interaksjoner, mens gjær to-hybrid er en in vitro-basert analyse for å analysere protein-protein-interaksjoner.
Å studere interaksjoner mellom cellulære molekyler kan bidra til å definere gjenkjennelsessteder involvert i genuttrykk og proteinveier. DNA- og proteininteraksjoner er integrert i cellulære prosesser som DNA-modifikasjoner og transkripsjonsregulering osv. På den annen side spiller protein- og proteininteraksjoner viktige roller i cellulære prosesser som replikasjon, transkripsjon, translasjon og sign altransduksjon. Derfor er det kritisk viktig å identifisere disse interaksjonene mellom cellulære molekyler gjennom forskjellige analyser. Gjær en hybrid og gjær to hybrid er to in vitro-baserte analyser for å analysere DNA-protein- og protein-protein-interaksjoner.
Hva er Yeast One Hybrid?
Gjær én hybrid (Y1H) er en in vitro-basert analyse for å analysere intracellulære DNA-protein-interaksjoner. Denne metoden ble først etablert av Wang og Reed i 1993. Siden den gang har den vist en større kraft innen biologisk forskning. I denne analysen er det to hovedkomponenter: DNA-agn og proteinbytter.
Figur 01: Yeast One Hybrid
I prosedyren blir en DNA-sekvens (DNA-agn) først klonet oppstrøms for to forskjellige reportere (HIS3, LacZ). Disse reporterkonstruksjonene er integrert i genomet til en gjærstamme. Transkripsjonsfaktorer tas som proteinbytter. Transkripsjonsfaktorer er smeltet sammen til det transkripsjonelle aktiveringsdomenet (AD) av gjær Gal4 transkripsjonsfaktor for å lage hybridproteiner. Hele dette hybridproteinet integreres i et plasmid før det introduseres i gjærstammen. Etter introduksjonen av det rekombinante plasmidet, når transkripsjonsfaktoren interagerer med DNA-fragmentet, aktiverer AD-delen reportergenekspresjonen (HIS3 eller LacZ). Sekvensering av plasmidene tillater identifikasjon av transkripsjonsfaktoren som kan binde seg til DNA-fragmentet. Nylig ble gjær en hybridmetode brukt for å forske på sykdomsdiagnose. Derfor vil denne analysen i fremtiden bli mer utbredt i vitenskapelig forskning og medisinske behandlinger.
Hva er Yeast Two Hybrid?
Gjær to hybrid (Y2H) er en in vitro-basert analyse for å analysere intracellulære protein- og proteininteraksjoner. Denne metoden ble opprinnelig funnet av Stanley Fields og Ok-Kyu Song i 1989. Denne teknikken oppdager protein-protein-interaksjoner ved å bruke Gal4-transkripsjonsfaktoren til gjæren.
Figur 02: Yeast Two Hybrid
I denne metoden konstrueres først to fusjoner (hybrider) ved å bruke proteiner av interesse: fusjon av ett protein med DNA-bindende domene (DBD) og ved å fusjonere det andre proteinet med aktivatordomenet (AD) til Gal4-transkripsjonsfaktoren. Proteinet smeltet sammen med DBD er kjent som agn, mens proteinet smeltet sammen med AD er kjent som byttedyr. I gjærstammen, etter interaksjonen mellom agn og byttedyr, bringes DBD og AD i umiddelbar nærhet for å generere en funksjonell Gal4-transkripsjonsfaktor oppstrøms for reportergenet. Den funksjonelle transkripsjonsfaktoren aktiverer reportergenekspresjon. Videre brukes denne metoden for tiden for å screene interaksjonene mellom integrerte membranproteiner i pattedyrceller.
Hva er likhetene mellom Yeast One Hybrid og Yeast Two Hybrid?
- Gjær en hybrid og gjær to hybrid er to in vitro-baserte analyser for å analysere DNA-protein- og protein-protein-interaksjoner.
- Disse analysene bruker gjærstammer.
- Begge analysene bruker aktiveringsdomenet (AD) til Gal4-transkripsjonsfaktoren.
- De bruker uttrykk for reportergen (HIS3 eller LacZ) for å oppdage interaksjoner.
- De har agn og byttedyr.
- Begge analysene er svært nyttige i moderne biologisk forskning.
Hva er forskjellen mellom Gjær One Hybrid og Yeast Two Hybrid?
Gjær en hybrid er en in vitro-basert analyse for å analysere DNA- og proteininteraksjoner, mens gjær to-hybrid er en in vitro-basert analyse for å analysere protein- og proteininteraksjoner. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom gjær en hybrid og gjær to hybrid. Videre, i en hybrid gjær, er agn et DNA-fragment, og byttedyr er et proteinmolekyl. På den annen side, i gjær to hybrid, er både agn og byttedyr proteinmolekyler.
Infografikken nedenfor viser forskjellene mellom gjær en hybrid og gjær to hybrid i tabellform for side ved side sammenligning.
Sammendrag – Gjær One Hybrid vs Gjær Two Hybrid
Gjær én hybrid og gjær to hybrid er to viktige in vitro-baserte analyser. Gjær en hybrid er en in vitro basert analyse for å analysere DNA og protein interaksjoner mens gjær to hybrid er en in vitro basert analyse for å analysere protein og protein interaksjoner. Dermed er dette hovedforskjellen mellom gjær en hybrid og gjær to hybrid.
