Key Difference – Nitrocellulose vs Nylon Membrane
Blotting er en viktig teknikk for påvisning av spesifikke sekvenser av DNA, RNA og proteiner fra deres blandinger innen molekylærbiologi. Det gjøres ved hjelp av en membran k alt blot. Det er forskjellige blotting-teknikker som nordlig, sørlig og vestlig blotting. Å velge en riktig membran for blotting-prosessen bør gjøres nøye for å forhindre uspesifikk binding og feil deteksjoner. Nitrocellulose, nylon og PVDF er ofte brukte membraner i blotting-teknikker. De har forskjellige egenskaper. Den viktigste forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran er at nitrocellulosemembraner har høyt proteinimmobiliseringspotensial, mens nylonmembraner har høyt nukleinsyreimmobiliseringspotensial. Begge typer membraner brukes imidlertid ofte i blotting-teknikker.
Hva er en nitrocellulosemembran?
Nitrocellulosemembran er et vanlig brukt membranfilter i nukleinsyre- og proteinblotting-teknikker. Den har et høyt proteinbindingspotensial. Derfor er nitrocellulosemembraner mye brukt i western blotting-teknikk. Nitrocellulosemembraner er kompatible med alle hybridiseringsteknikker og viser overlegen bindingskapasitet uten forstyrrelser. Nitrocellulosemembraner er naturlig hydrofile. De lager hydrofil interaksjon med molekyler og immobiliserer dem effektivt på membranen. Kommersielle nitrocellulosemembraner er tilgjengelige i to porestørrelser: 0,45 og 0,2 µm.
Figur 01: Nitrocellulosemembran brukt i western blotting
Hva er en nylonmembran?
Nylonmembran er en annen type kommersiell membran som brukes i blotting-teknikker. Den brukes alternativt med nitrocellulosemembraner for southern og northern blotting. Nylonmembraner er ideelle for southern blotting enn nitrocellulose på grunn av deres høye affinitet til binding med DNA. På grunn av flere unike egenskaper ved nylonmembraner, bruker forskere ofte nylonmembraner for sørlig og nordlig blotting i stedet for over nitrocellulosemembran. Nylonmembraner anbefales også for stripping og reprobing, i motsetning til nitrocellulose.
Figur 02: Nylonmembran brukt til southern blotting
Hva er forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran?
Nitrocellulose vs Nylon Membran |
|
| Nitrocellulosemembraner er sprø. | Nylonmembraner er mindre sprø. |
| Handling | |
| De er vanskelige å håndtere. | De er enkle å håndtere. |
| Reprobing | |
| Ustøttede nitrocellulosemembraner er vanskelige å prøve igjen. | Reprobing er enkelt med nylonmembraner. |
| Kompatibilitet med forskjellige lagringsbetingelser | |
| Nitrocellulosemembraner har mindre styrke til å tåle ulike lagringsforhold. | Nylonmembraner reagerer mer robust på ulike lagringsforhold. |
| Bruk | |
| Forfukting er nødvendig. | Forfukting er ikke nødvendig for nylonmembraner. |
| Hydrofil natur | |
| Nitrocellulosemembraner er hydrofile av natur, men er mindre hydrofile enn nylonmembraner. | De er svært hydrofile av natur. |
| Immobiliseringspotensial | |
| Nitrocellulosemembraner har mindre affinitet for nukleinsyrer. Men den har høy affinitet for proteiner. | Nylonmembraner har et høyt bindingspotensial med nukleinsyrer enn nitrocellulosemembraner. |
Sammendrag – Nitrocellulose vs Nylon Membran
Nitrocellulose- og nylonmembraner er spesielle ark som brukes i blotting-teknikk for å reprodusere båndmønsteret på gelen. De muliggjør muligheten for å påvise en spesifikk sekvens eller et protein fra blandingene ved å immobilisere dem på membranen. Når molekylene er immobilisert på membranen, kan den brukes som et substrat for hybridiseringsanalyse med merkede prober. Nitrocellulosemembran brukes ofte til proteindeteksjon i western blotting-teknikk på grunn av dens høye bindingsaffinitet med proteiner. Nylonmembraner brukes ofte til sørlig og nordlig blotting. Dette er forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran.
