Nøkkelforskjellen mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse er at kolorimetrisk analyse bestemmer konsentrasjonen av fargede forbindelser i en løsning, mens fluorometrisk analyse bestemmer den kinetiske mekanismen til en løsning.
En biokjemisk analyse er en teknikk som oppdager eller kvantifiserer aktiviteten til et biologisk molekyl eller stoff analytisk. Det er en in vitro prosess. Kolorimetrisk analyse og fluorometrisk analyse er to typer vanlige biokjemiske analyser utført i laboratorier. Flere teknikker som ELISA og western blotting er også komplekse biokjemiske analyser for kvantifisering av metabolsk aktivitet og måling av den funksjonelle oppførselen til biomolekyler som proteiner, enzymer og andre små molekyler. Disse typene analyser brukes til å identifisere protein-DNA, protein-RNA og protein-protein-interaksjoner.
Hva er en kolorimetrisk analyse?
En kolorimetrisk analyse er en teknikk som bestemmer konsentrasjonen av fargede forbindelser i en løsning. Med andre ord er kolorimetrisk analyse en reaksjon som fører til en fargeendring på grunn av en enzymatisk eller kjemisk reaksjon mellom reagenser og analytter. Kolorimetriske analyser praktiseres i biokjemi for å teste for enzymer, spesifikke forbindelser, hormoner, antistoffer og andre analytter. De bruker kolorimetre eller spektrofotometre. Kolorimetre er instrumenter som karakteriserer fargede prøver for å gi et objektivt mål på fargekarakteristikker. Et spektrofotometer er en enhet som måler lysintensiteten som en funksjon av fargen eller bølgelengden til lyset.
Figur 01: Kolorimetrisk analyse
Hvordan fungerer en kolorimetrisk analyse?
I en kolorimetrisk analyse tilberedes en plate med et spesielt antistoff bundet til brønner. Deretter legges prøven til. Dette kan tillate prøven å binde seg til antistoffet. Deretter tilsettes et deteksjonsantistoff og et substrat til brønnene for å reagere med deteksjonssonden. Stoppløsning tilsettes på slutten før avlesningen. En tom brønn k alt blank er igjen uten prøven. I den kolorimetriske analysen, jo mørkere fargen er, desto større er analyttkonsentrasjonen. Vanligvis trengs bare én bølgelengde for å ta avlesningen. Men hvis det er en referansemåling, brukes to eller flere bølgelengder.
Hva er en fluorometrisk analyse?
Den fluorometriske analysen er en teknikk som bestemmer den kinetiske mekanismen til enzymreaksjoner. En fluorometrisk analyse finner sted med en dannelse av et fluorescerende produkt fra et ikke-fluorescerende substrat eller omvendt. Denne analysen bruker også fluorescensresonansenergioverføring (FRET) hvor den enzymatiske reaksjonen endrer posisjonen til to fluoroforer i substratet og dermed endrer fluorescensintensiteten.
Figur 02: Fluorometrisk analyse
Fluorometriske analyser er generelt mye mer følsomme enn andre analyser. De diagnostiske enzymberegningene i vevs-, celle- eller væskeprøver fra pasienter øker på grunn av dens høyere følsomhet.
Hvordan fungerer en fluorometrisk analyse?
I en fluorometrisk analyse tilsettes et substrat til prøven i platen, og fluorescensresponsen tas ved hjelp av plateleseren. Her måles hver celle separat. Ugjennomsiktige plater brukes i fluorometriske analyser. Dette reduserer spredningen av lys. To bølgelengder er nødvendig for denne typen analyse. Den ene bølgelengden er for å oppdage eksitasjonen og den andre bølgelengden er for emisjonen.
Hva er likhetene mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse?
- kolorimetrisk analyse og fluorometrisk analyse er to typer biokjemiske analyser.
- Begge analysene er utført for medisinsk diagnostikk.
- Disse analysene involverer en enzymatisk reaksjon.
- Begge analysene involverer et substrat og analytter.
Hva er forskjellen mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse?
En kolorimetrisk analyse er en teknikk som bestemmer konsentrasjonen av fargede forbindelser i en løsning, mens fluorometrisk analyse er en teknikk som bestemmer den kinetiske mekanismen til enzymreaksjoner. Så dette er nøkkelforskjellen mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse. Dessuten er de fluorometriske assayene mer følsomme enn de kolorimetriske assayene; dermed har fluorometriske analyser evnen til å oppdage flere analytter. Dermed er dette en annen viktig forskjell mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse. Videre krever fluorometriske analyser to bølgelengder, mens kolorimetriske analyser utføres med én bølgelengde.
Infografien nedenfor viser flere forskjeller mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse.
sammendrag – kolorimetrisk vs fluorometrisk analyse
En biokjemisk analyse er en analytisk prosess som brukes til å bestemme og kvantifisere cellulære metabolske reaksjoner. Kolorimetrisk analyse og fluorometrisk analyse er to typer biokjemiske analyser. Kolorimetrisk analyse er en reaksjon som fører til en fargeendring på grunn av en enzymatisk eller kjemisk reaksjon mellom reagenser og analytter, mens fluorometrisk analyse er en teknikk som brukes til å bestemme den kinetiske mekanismen til enzymreaksjoner. Begge analysene er avhengige av en enzymatisk reaksjon som involverer et substrat og en analytt. Fluorometriske analyser er mer følsomme enn kolorimetriske analyser. Det viktigste er at fluorometriske analyser krever to bølgelengder, mens kolorimetriske analyser kan utføres med bare én bølgelengde. Dermed oppsummerer dette forskjellen mellom kolorimetrisk og fluorometrisk analyse.
