Nøkkelforskjellen mellom radioimmunoanalyse og immunradiometrisk analyse er at i radioimmunoanalyse kombineres prøven eller forbindelsen som skal måles med et radioaktivt antigen før kombinasjonen, mens i den immunradiometriske analysen kombineres prøven eller forbindelsen umiddelbart med det radiomerkede antistoffer.
En immunoanalyse er en biokjemisk test som oppdager tilstedeværelsen eller konsentrasjonen av makromolekyler i en løsning som bruker et antistoff eller antigen. Fluorescerende og radioaktive antistoffer brukes til å måle antigener i en prøve. Opprinnelig ble antistoffer brukt i utfellingsteknikker som immunutfelling, immundiffusjon og immunelektroforese for serumproteinanalyse. For tiden brukes høysensitive teknikker som radioimmunoassay og immunradiometriske analyser for måling av legemidler, tumormarkører og hormoner.
Hva er radioimmunoassay-analyse?
Radioimmunoassay (RIA) er en immunoassay som bruker radioaktive elementer trinnvis dannelse av antigen-antistoffkomplekser. RIA bruker vanligvis radioaktive antistoffer for å oppdage mengden antigen i en prøve. RIA er en veldig spesifikk og svært sensitiv in vitro-analyse. Prinsippet bak RIA er konkurransebinding. Her konkurrerer et radioaktivt antigen mot et ikke-radioaktivt antigen om en konstant mengde antistoff eller reseptorbindingsseter. RIA krever spesiell lisensiering og forholdsregler siden radioaktive stoffer brukes, og det er fortsatt blant de billigste teknikkene.
Figur 01: Immunoassay
Under RIA blir en kjent mengde antigen ofte gjort radioaktivt ved å merke det med gamma-radioaktive isotoper av jod knyttet til tyrosin. Deretter kombineres dette antigenet med en kjent mengde antistoff. Her binder både antigen og antistoff seg spesifikt til hverandre. Deretter tilsettes en blodserumprøve for å starte en konkurrerende reaksjon mellom de merkede antigenene og umerkede antigener i serumet med spesifikke antistoffer. I denne reaksjonen frigjør antistoffer en viss mengde merket antigen. Denne mengden er proporsjonal med forholdet mellom merket og umerket antigen. Til slutt genereres en bindingskurve for å utlede mengden antigen i en pasients blodserum.
Hva er immunradiometrisk analyse?
Immunoradiometrisk assay (IRMA) er en immunoanalyse som bruker radiomerkede antistoffer. I IRMA merkes antistoffene ved hjelp av radioisotoper. Disse antistoffene binder seg til antigenene som finnes i en spesifikk prøve. I en positiv prøve binder antistoffer som er radioaktivt merket seg til de frie epitopene til antigener. Dette danner et antigen-antistoffkompleks.
Under den andre reaksjonen fjernes de merkede antistoffene som ikke er bundet ved bruk av et fastfase-antigen. Det gjenværende antallet radioaktive antistoffer i løsningen er en direkte funksjon av antigenkonsentrasjonen. IRMA er kjent som en overskytende reagensanalyse der en overflødig mengde radiomerket antistoff brukes som reagens. Her får en overskuddskonsentrasjon av merket antistoff eller antigen reagere. Som det siste trinnet separeres de antigenbundne og frie antistoffene, og den antigenbundne fraksjonen utsettes for radioaktive analyser. Her er aktiviteten til fraksjonen direkte proporsjonal med konsentrasjonen av antigenet.
Hva er likhetene mellom radioimmunoassay og immunradiometrisk analyse?
- Både radioimmunoassay og immunoradiometrisk assay er immunoassays som bruker radioaktive elementer i trinnvis dannelse av antigen-antistoffkomplekser.
- De danner et antigen-antistoffkompleks.
Hva er forskjellen mellom radioimmunoassay og immunradiometrisk analyse?
Radioimmunoassay er en immunanalyse som bestemmer antistoffnivåer av et antigen merket med en radioisotop, mens immunradiometrisk analyse er en overskytende reagensanalyse som bruker en overskytende konsentrasjon av radiomerket antistoff. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom radioimmunoanalyse og immunradiometrisk analyse. IRMA er i stand til å gi høyere følsomhet enn RIA. I RIA er antigener merket med gamma-radioaktive isotoper av jod, mens antistoffer i IRMA er merket med isotoper av jod. Så dette er også en forskjell mellom radioimmunoassay og immunradiometrisk assay. Siden IRMA er en overflødig reagensteknikk, utføres analysen på kortere tid enn RIA.
Den følgende tabellen oppsummerer forskjellene mellom radioimmunoanalyse og immunradiometrisk analyse.
Sammendrag – Radioimmunoassay vs Immunoradiometrisk Assay
Radioimmunoassay er en immunoanalyse som bruker radioaktive elementer i trinnvis dannelse for å bestemme antistoffnivåer. RIA bruker vanligvis radioaktive antistoffer. Et radioaktivt antigen konkurrerer mot et ikke-radioaktivt antigen om en konstant mengde antistoff eller reseptorbindingssteder. Den immunradiometriske analysen er en immunoanalyse utført for å bestemme antigennivåer i en prøve ved bruk av radiomerkede antistoffer. Disse antistoffene binder seg til antigener som finnes i en spesifikk prøve. På slutten av hver analyse dannes et antigen-antistoffkompleks. For å oppnå resultatene av analysene tegnes en bindingskurve. I radioimmunoanalyse er den merket antigenmengde proporsjonal med forholdet mellom merket og umerket antigen, men i en immunradiometrisk analyse er aktiviteten til den antigenbundne fraksjonen direkte proporsjonal med konsentrasjonen av antigenet. Dette er sammendraget av forskjellen mellom radioimmunoanalyse og immunradiometrisk analyse.
