Nøkkelforskjell – YAC vs BAC Vectors
Vektorer brukes i molekylær kloning. En vektor kan defineres som et DNA-molekyl som oppfører seg som en bærer for å frakte fremmed genetisk materiale inn i en annen celle. En vektor som inneholder fremmed DNA er kjent som rekombinant DNA, og den bør ha evnen til å replikere og uttrykke den i vertsorganismen. Gjær kunstig kromosom (YAC) og bakteriell kunstig kromosom (BAC) er to typer vektorer involvert i kloning. Den viktigste forskjellen mellom YAC og BAC er at YAC er et kunstig konstruert vektorsystem som bruker en spesifikk region av gjærkromosom for å sette inn store segmenter av genetisk materiale til gjærceller, mens BAC er et kunstig konstruert vektorsystem som bruker en spesifikk region av E.coli-kromosom for å sette inn store segmenter av DNA i E. coli-celler.
Hva er YAC-vektorer?
YAC (Gjær kunstig kromosom) er et kunstig bygget kromosom som har evnen til å bære et stort segment av fremmed DNA og replikere i gjærcellene. Den har en sentromer, telomerer samt autonomt replikerende sekvenser som er avgjørende for replikasjon og stabilitet. YAC bør også bære en selektiv markør eller markører og restriksjonssteder for å gjøre det til en effektiv kloningsvektor. En stor sekvens fra 1000 kb til 2000 kb kan settes inn i YAC og overføres til gjær. Transformasjonseffektiviteten til YAC er svært lav.
Figur 01: YAC Vector
Hva er BAC-vektorer?
Bakterielt kunstig kromosom (BAC) er et kunstig konstruert kromosom for molekylær kloning. Den har spesifikke regioner av E. coli F-plasmid og den er sirkulær og superkveilet. BAC er utviklet for å klone DNA-fragmenter til bakterier, spesielt til E. coli. Den kan bære DNA-fragmenter med størrelser opp til 300 kb. Sammenlignet med YAC, er BAC-kloningsinnlegg mindre i størrelse. BAC-er ble utviklet i 1992, og den er fortsatt populær på grunn av dens stabilitet og enkle konstruksjon. BAC-er er også nyttige for å utvikle vaksiner.
Figur 02: BAC-vektor i molekylær kloning
Hva er forskjellen mellom YAC- og BAC-vektorer?
YAC vs BAC Vectors |
|
| YAC er et genmanipulert kromosom med bruk av gjær-DNA for kloning. | BAC er et genetisk konstruert DNA-molekyl som bruker E. coli DNA for kloningsformål. |
| Kjønn | |
| YAC-er ble designet for å klone store fragmenter av genomisk DNA inn i gjær. | BAC-er ble utviklet for kloning av store genomiske fragmenter inn i Escherichia coli. |
| Sett inn lengde | |
| YAC-er kan inneholde genomiske inserts på størrelse med megabase.(1000 kb – 2000 kb). | BAC-er kan bære innsatser på 200–300 kb eller mindre. |
| Construction | |
| YAC DNA er vanskelig å rense intakt og krever høy konsentrasjon for å generere YAC vektorsystem. | BAC er lett å rense intakt og kan enkelt konstrueres. |
| Chimerism | |
| YAC-er er ofte kimære. | BAC-er er sjelden kimære. |
| Stability | |
| YAC er ustabil. | BAC er stabil. |
| Endringer | |
| Gjærrekombinasjon er svært mulig og forblir alltid aktiv. Derfor kan den generere slettinger og andre omorganiseringer i en YAC. | E. coli-rekombinasjon forhindres og slås på når det er nødvendig. Derfor reduserer det uønskede omorganiseringer i BAC-er. |
| Vedlikehold | |
| Manipulering av rekombinante YAC-er krever vanligvis at YAC overføres til E. coli for påfølgende manipulering. Derfor er det en møysommelig prosess. | BAC-modifikasjon skjer direkte i E. coli. Så det er ikke behov for DNA-overføring. Derfor er ikke prosessen arbeidskrevende. |
Sammendrag – YAC vs BAC Vectors
YAC har blitt et viktig forskningsverktøy i kloningsprosesser på grunn av dets evne til å klone store fragmenter av DNA inn i vertsorganismen. Imidlertid har YAC-er flere ulemper som vektorer som konstruksjonsvansker, kimerisme, ustabilitet osv. For å overvinne disse problemene har forskere derfor utviklet BAC-vektorer. BAC har blitt konstruert ved å bruke spesifikke regioner av E. coli-kromosomet. Det er en stabil vektor og kan lett konstrueres. Lengden på DNA som BAC kan håndtere er imidlertid opptil 20 ganger mindre enn YAC. Dette er forskjellen mellom YAC og BAC vektorsystemer. I dag er BAC mer foretrukket fremfor YAC i laboratoriene.
