Nøkkelforskjellen mellom GFP og EGFP er at GFP er et villtypeprotein inkorporert i molekylær kloning av ikke-pattedyrceller, mens EGFP er en forbedret eller konstruert type GFP som kan brukes på pattedyrceller.
Molekylær kloning er en avansert teknikk som forskere bruker enormt til å uttrykke proteiner via rekombinant teknologi. I rekombinant DNA-teknologi er det nødvendig å transformere rekombinant vektor vellykket til vertsorganisme. Under transformasjonsprosessen bør det derfor identifiseres og bekreftes om genet av interesse har blitt transformert eller ikke til verten. For å vurdere dette tar molekylærbiologer i bruk flere teknikker. Av disse teknikkene er en reportergen. Disse reportergenene fungerer som selekterbare markører for å velge de riktige transformantene. Green Fluorescent Protein (GFP) og Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) er således to reporterproteiner som brukes i molekylær kloning.
Hva er GFP?
GFP er et villtypeprotein som inneholder 238 aminosyrerester og flere valgbare regioner av aminosyresekvenser som skiller det fra de andre fluorescerende proteinene. Videre var dette villtypeproteinet opprinnelig isolert fra Aequorea Victoria; en type maneter. Men i naturfenomener var maneten i stand til å produsere grønn fargefluorescens som respons på visse stimuli.
Tidligere overrasket dette konseptet forskerne, og de bestemte seg for å bruke det på deres rekombinante DNA-teknologier. Følgelig brukte forskere denne mutante formen av villtypegenet som et reportergen i sine genekspresjonsstudier. Villtypegenet til GFP er i stand til å produsere et protein som gir fluorescens ved romtemperatur eller under UV-lys. Derfor, når den settes inn i transformantene, uttrykker og produserer den fluorescens. Hvis fluorescensen resulterer etter transformasjonsprosessen, bekrefter det suksessen til transformasjonsprosessen. Med enkle ord signaliserer fluorescensemisjon den vellykkede transformasjonen av vektoren som bærer genet av interesse inn i verten.
Figur 01: GFP
På grunn av denne grunn fungerer GFP som en in vivo-markør for genuttrykk. For tiden er genteknologiske teknikker i bruk for å produsere GFP. Også mange forbedrede versjoner av GFP som EGFP er tilgjengelige. Derfor muliggjør dette effektiv bruk av GFP i molekylær kloning og genekspresjonsstudier.
Hva er EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein eller EGFP er en forbedret versjon av GFP. Med enkle ord kan vi definere EGFP som en konstruert versjon av villtype GFP. Når villtypegenet til GFP muterer, gir det gunstige effekter. Derfor tillater det muterte genet til GFP uttrykk for nye karakterer, og som et resultat av det kan vi produsere Enhanced GFP med forbedrede egenskaper. Videre kan vi introdusere mutasjoner med hell i villtype GFP-genet ved bruk av bestråling eller kjemiske metoder. Disse muterte genene produserer deretter EGFP, som har mer fordelaktige egenskaper.
Figur 02: EGFP
De forbedrede egenskapene til EGFP er som følger;
- Kunne sende ut sterkere fluorescenssignaler.
- Har høy følsomhet.
- Kan bruke den på pattedyrceller i stedet for prokaryoter og andre eukaryoter på lavere nivå.
- Gir også økt renhet av produktet.
Derfor, sammenlignet med GFP, er EGFP det foretrukne valget for genekspresjonsstudier. Produktet er imidlertid dyrere sammenlignet med GFP.
Hva er likhetene mellom GFP og EGFP?
- GFP og EGFP er to proteiner som har evnen til å avgi grønn farge
- Derfor fungerer begge som reporterproteiner i genekspresjonsstudier.
- Det er også mulig å syntetisere begge ved hjelp av rekombinant DNA-teknologi.
- Dessuten er det enkelt å mutere disse to typene ytterligere for å syntetisere forbedrede former.
Hva er forskjellen mellom GFP og EGFP?
Reportergenet er et gen som fester seg til genet av interesse i rekombinant DNA-teknologi. Det signaliserer vellykket transformasjon av den rekombinante vektoren til verten. Her er GFP og EGFP to typer grønne fluorescerende proteiner som fungerer som reporterproteiner. Den viktigste forskjellen mellom GFP og EGFP er imidlertid at GFP er en villtype mens EGFP er en konstruert versjon av GFP. Videre har EGFP mer fordelaktige egenskaper enn GFP. For eksempel produserer EGFP sterkere fluorescerende lys og er mer følsom enn GFP. En annen forskjell mellom GFP og EGFP er systemene vi kan bruke disse i. Ikke-pattedyrsystemer bruker GFP mens pattedyrsystemer bruker EGFP.
Infografikken nedenfor viser forskjellen mellom GFP og EGFP i tabellform.
Sammendrag – GFP vs EGFP
GFP og EGFP er reporterproteiner i molekylær kloning og genekspresjonsstudier. GFP er villtypeproteinet, som er et grønt fluorescerende protein. Proteinet var opprinnelig isolert fra maneten Aequorea victoria. I motsetning til dette er EFGP en forbedret form for GFP-protein. Det er en mutant av villtypen med forbedrede egenskaper. Derfor har EFGP høyere signalstyrke og høyere følsomhet. Derfor kan vi bruke det på pattedyrvektorer. I kontrast er bruken av GFP hovedsakelig bare på ikke-pattedyrvektorer. Alt i alt er dette forskjellen mellom GFP og EGFP.
