Nøkkelforskjellen mellom isokratisk og gradienteluering er at isokratisk eluering refererer til å opprettholde en konstant konsentrasjon i den mobile fasen, mens gradienteluering refererer til å opprettholde en varierende konsentrasjon i den mobile fasen.
Begrepene isokratisk og gradienteluering brukes i kromatografi. Under en kromatografisk kjøring bruker vi en stasjonær fase, som er et ikke-bevegelig stoff, sammen med en mobil fase, det bevegelige stoffet. Den isokratiske og gradientelueringen beskriver egenskapene til den mobile fasen.
Hva er isokratisk eluering?
Isokratisk eluering er et begrep som brukes i kromatografi når mobilfasen har en konstant konsentrasjon. Her er konsentrasjonen av mobilfasen konstant gjennom hele den kromatografiske prosessen. I denne prosessen kan vi observere toppbredden økende med retensjonstiden lineært i kromatogrammet. Dette fører imidlertid til en ulempe - de sent-eluerende toppene for sen eluering blir veldig flate og brede. Derfor blir disse brede toppene vanskelige å gjenkjenne som topper.
I isokratisk eluering endres ikke selektiviteten i henhold til kolonnedimensjonene. Dette betyr at selektiviteten ikke avhenger av endringene i kolonnedimensjonene. Her regnes lengden og diameteren som søyledimensjoner. Derfor eluerer toppene i samme rekkefølge.
Hva er gradienteluering?
Gradienteluering er et begrep som brukes i kromatografi når her den mobile fasen har en varierende konsentrasjon. Konsentrasjonen av mobilfasen trenger med andre ord ikke forbli konstant. For eksempel, i HPLC, bruker en vanlig separasjonsmetode metanol 10% til å begynne med og slutter ved 90%, ved å øke konsentrasjonen gradvis. Den mobile fasen har to komponenter: et svakt løsemiddel og et sterkt løsemiddel. Svak løsningsmiddel lar det oppløste stoffet eluere sakte mens sterkt løsningsmiddel forårsaker den raske elueringen av det løste stoffet. I omvendt fasekromatografi bruker vi vann som det svake løsningsmidlet og organisk løsningsmiddel som det sterke løsningsmidlet.
Figur 01: HPLC
Dessuten reduserer gradientelueringsmetoden de senere eluerende komponentene for å få dem til å eluere raskere, noe som gir en smal topp i kromatogrammet. Denne metoden forbedrer toppformen og topphøyden også. Videre, i gradientelueringsteknikk, endres elueringsrekkefølgen med endringene i kolonnedimensjonene.
Hva er forskjellen mellom isokratisk og gradienteluering?
Begrepene isokratisk og gradienteluering brukes i kromatografi. Isokratisk og gradienteluering beskriver egenskapene til den mobile fasen. Hovedforskjellen mellom isokratisk og gradienteluering er at isokratisk eluering refererer til opprettholdelse av en konstant konsentrasjon i den mobile fasen, mens gradienteluering refererer til opprettholdelsen av en varierende konsentrasjon i den mobile fasen.
I den isokratiske elueringsteknikken øker toppbredden med retensjonstiden lineært. I gradientelueringsteknikken reduseres imidlertid retensjonen av de senere eluerende komponentene, slik at elueringen blir raskere og gir smale topper. Bortsett fra det, i den isokratiske elueringen, avhenger ikke selektiviteten av kolonnedimensjonene, men i gradienteluering endres selektiviteten med skiftende kolonnedimensjoner.
Den følgende tabellen oppsummerer forskjellen mellom isokratisk og gradienteluering.
Sammendrag – Isocratic vs Gradient Elution
Isokratisk eluering og gradienteluering beskriver egenskapene til den mobile fasen. Hovedforskjellen mellom isokratisk og gradienteluering er at isokratisk eluering refererer til opprettholdelse av en konstant konsentrasjon i den mobile fasen, mens gradienteluering refererer til opprettholdelsen av en varierende konsentrasjon i den mobile fasen.
