Nøkkelforskjellen mellom DNA- og RNA-isolering er at DNA-isolering er en prosedyre der en type nukleinsyre k alt DNA ekstraheres fra en biologisk celle, mens RNA-isolering er en prosedyre der en type nukleinsyre k alt RNA er ekstrahert fra en biologisk celle.
Nukleinsyreisolering er utgangspunktet i en lang rekke nedstrømsapplikasjoner. Den høye kvaliteten på nukleinsyrer i startprøvene er en nøkkelfaktor for suksessen til påfølgende nedstrømsapplikasjoner. Nukleinsyreisolering kan defineres som en serie trinn for å oppnå nukleinsyre i en renhetsprøve som kan brukes for forskjellige nedstrøms applikasjonstrinn. Hensikten med nukleinsyreekstraksjon er å desintegrere cellemembranen og oppnå maksimal eliminering av lipider og proteiner for å oppnå rene nukleinsyrer som DNA eller RNA.
Hva er DNA-isolering?
DNA-isolering er en rutineprosedyre der en type nukleinsyre k alt DNA ekstraheres fra en biologisk celle. DNA-isolering utføres ved å trekke ut DNA fra blod, frosne vevsprøver og parafinvevsblokker. Det er tre hovedtrinn i DNA-isolering, inkludert cellelyse, ekstrahering av DNA og utfelling. Ved cellelyse blir cellene i en prøve separert fra hverandre ofte ved fysiske midler som sliping eller vortexing og satt i en løsning som inneholder s alt. Vanligvis hjelper de positivt ladede natriumionene i s altet med å beskytte de negativt ladede fosfatgruppene som løper langs ryggraden i DNA. Senere tilsettes et vaskemiddel for å bryte ned lipidene i cellemembranen og kjernene, som frigjør DNA etter hvert som disse membranene blir ødelagt.
Figur 01: DNA-isolering
DNA-ekstraksjon utføres for å få en ren DNA-prøve. Ofte tilsettes et proteaseenzym for å bryte ned DNA-assosierte proteiner og andre cellulære proteiner. Dessuten kan noe av celleavfallet fjernes ved å filtrere prøven. Til slutt blir DNA utfelt ved bruk av alkohol. Videre, hvis det er mye DNA, kan et gjerrig hvitt bunnfall på slutten av prosedyren observeres.
Hva er RNA-isolering?
RNA-isolering er en prosedyre hvor en type nukleinsyre k alt RNA ekstraheres fra en biologisk celle. Denne prosedyren er ofte komplisert av tilstedeværelsen av ribonuklease-enzymer i celler og vev som bryter ned RNA. Flere metoder brukes i molekylærbiologi for å isolere RNA fra prøver, for eksempel guanidinium-tiocyanat-fenol-kloroform-ekstraksjon.
Figur 02: RNA-isolering
RNA-isolering består vanligvis av flere trinn, inkludert cellelyse og homogenisering, quenching av biokjemiske prosesser, nukleinsyrefordeling, RNA-henting, rårensing og vurdering av kvaliteten på RNA. Den filterpapirbaserte lyserings- og elueringsmetoden har høy gjennomstrømningskapasitet i RNA-ekstraksjon. Videre er RNA-ekstraksjon i flytende nitrogen ved bruk av en morter og stamper også en svært nyttig metode da den forhindrer ribonukleaseaktivitet.
Hva er likhetene mellom DNA- og RNA-isolering?
- DNA- og RNA-isolering er to typer nukleinsyreisoleringsprosedyrer.
- Begge prosedyrer har lignende grunnleggende trinn, som cellelyse, ekstraksjon og rensing.
- Disse prosedyrene isolerer viktige nukleinsyretyper som har en rekke nedstrømsapplikasjoner.
- De utføres i laboratorieoppsett.
- De kan utføres ved hjelp av produserte sett.
Hva er forskjellen mellom DNA- og RNA-isolering?
I DNA-isolasjon ekstraheres en type nukleinsyre k alt DNA fra en biologisk celle, mens i RNA-isolasjon ekstraheres en type nukleinsyre k alt RNA fra en biologisk celle. Dermed er dette nøkkelforskjellen mellom DNA- og RNA-isolering. Videre utføres DNA-isoleringen norm alt ved rundt pH 7 til 8, mens RNA-isolering norm alt utføres ved rundt pH 4,5.
Infografien nedenfor presenterer forskjellene mellom DNA- og RNA-isolasjon i tabellform for side ved side-sammenligning.
Sammendrag – DNA vs RNA-isolering
DNA- og RNA-isolering er to typer nukleinsyreisoleringsprosedyrer. DNA-isolering er en prosedyre der DNA ekstraheres fra en biologisk celle. RNA-isolering er en prosedyre der RNA ekstraheres fra en biologisk celle. Så dette er nøkkelforskjellen mellom DNA- og RNA-isolering.
