Nøkkelforskjellen mellom gelfiltrering og affinitetskromatografi er at gelfiltreringskromatografi avhenger av forskjellene i molekylvekt eller størrelse på analyttprøven, mens affinitetskromatografi avhenger av affiniteten til en analytt til en immobilisert ligand.
Begrepet kromatografi i analytisk kjemi refererer til prosessen med separering av komponenter i en blanding ved bruk av forskjellige teknikker. Kromatografi er et samlenavn som representerer en rekke forskjellige metoder for separasjon.
Hva er gelfiltreringskromatografi?
Gelfiltreringskromatografi er en analytisk teknikk der separasjonen av komponenter avhenger av forskjellen i molekylvekt eller størrelse. Denne teknikken er også kjent som størrelseseksklusjonskromatografi eller molekylsiktkromatografi. Separasjonsteknikken i denne prosessen avhenger av den forskjellige evnen til molekylene i prøven til å trenge inn i porene til gelfiltreringsmediet.
I gelfiltreringsteknikken inneholder den stasjonære fasen perler av hydratisert, svamplignende materiale med porer med molekylære dimensjoner som inneholder et sm alt område av størrelser. Hvis vi fører en vandig løsning bestående av molekyler av forskjellige størrelser gjennom en kolonne som inneholder disse "molekylsilene", beveger molekylene som er større enn porene i filtreringsmediet seg raskt gjennom kolonnen. I kontrast kommer de mindre molekylene inn i porene i gelen og har en tendens til å bevege seg sakte gjennom kolonnen. Molekyler eluerer fra kolonnen i rekkefølge av avtagende molekylstørrelse. Her er eksklusjonsgrensen for gelen molekylmassen til de minste molekylene som ikke kan trenge gjennom porene til en gitt gel.
Det finnes forskjellige typer gelfiltreringsteknikker, for eksempel indirekte gelfiltreringsmetode, steady-state gelfiltrering, gelperledialyse osv. Indirekte gelfiltreringskromatografi er nyttig ved bestemmelse av frie skjoldbruskhormoner. Steady-state gelfiltreringskromatografi er en indirekte teknikk som hovedsakelig er nyttig for måling av frie steroider som kortisol, testosteron osv. Gelperledialyse er derimot en modifikasjon av steady-state gelfiltrering som er relativt enklere.
Hva er affinitetskromatografi?
Affinitetskromatografi er en analytisk teknikk og en separasjonsmetode som avhenger av en spesifikk bindingsinteraksjon mellom en immobilisert ligand og dens bindingspartner. Noen eksempler inkluderer antistoff-antigen-binding, enzym-substrat-binding og enzym-inhibitor-binding. Derfor har denne teknikken mange viktige anvendelser innen nukleinsyrerensing, proteinrensing fra celleekstrakter og rensing fra blod.
I denne teknikken er den viktigste egenskapen ligandimmobilisering. Vi kan bruke ulike materialer som akrylater og silikagel til dette. Det er viktig å forhindre sterisk interferens av målmolekylet til liganden. Dessuten er en inhibitor festet til den faste fasen. Vi kaller denne inhibitoren en spacer. Klassisk sett består en spacer av en hydrokarbonkjede.
Den stasjonære fasen av affinitetskromatografien inneholder kjernen, spaceren og liganden. Noen ganger har den også et metallion som er koblet til liganden. Den mest foretrukne faste fasen for den stasjonære fasen i denne teknikken er agarosegel fordi den lett dispenseres for å fylle og pakke kolonnen med harpikssenger av enhver størrelse, og den er stor nok til at biomolekyler kan strømme fritt inn i og gjennom kulene. Ligandene kan kovalent feste seg til kulepolymeren på forskjellige måter. De vanligste spacerforbindelsene er cyanogenbromid, epoksid, epoksid med C6-syre og diamin. På den annen side er liganden vi kan bruke forskjellig i henhold til målet, f.eks. antistoff-antigen, jern- eller aluminiumioner-fosfoproteiner, avidin-biotin, glutation-GST, chelator-His-merkede proteiner, etc.
Hva er forskjellen mellom gelfiltrering og affinitetskromatografi?
Kromatografi er en viktig analyseteknikk. Gelfiltreringskromatografi og affinitetskromatografi er to viktige varianter av kromatografi. Den viktigste forskjellen mellom gelfiltrering og affinitetskromatografi er at gelfiltreringskromatografi avhenger av forskjellene i molekylvekt eller størrelse på analyttprøven, mens affinitetskromatografi avhenger av affiniteten til en analytt til en immobilisert ligand.
sammendrag – gelfiltrering vs affinitetskromatografi
Det finnes forskjellige typer kromatografiske teknikker i henhold til deres anvendelse og typen av analyttprøven. Gelfiltrering og affinitetskromatografi er to slike typer teknikker. Den viktigste forskjellen mellom gelfiltrering og affinitetskromatografi er at gelfiltreringskromatografi avhenger av forskjellene i molekylvekt eller størrelse på analyttprøven, mens affinitetskromatografi avhenger av affiniteten til en analytt til en immobilisert ligand.
