Nøkkelforskjell – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleasene er nukleaser som spesifikt bryter ned RNA til mindre enheter. De kan deles inn i to kategorier; endoribonukleaser og exoribonukleaser. Endoribonuklease er en endonuklease som enten kan bryte ned enkelttrådet eller dobbelttrådet RNA. Den sp alter fosfodiesterbindingene i en RNA-polynukleotidkjede. Eksemplene er RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P og RNase H. Exoribonuklease er en eksonuklease som degraderte RNA ved å fjerne terminale nukleotider fra enten 5'enden eller 3'enden av RNA-molekylet. Eksemplene er RNase R, RNase II, RNase D og RNase PH. Den viktigste forskjellen mellom RNASE A og RNASE H er at RNase A er en bukspyttkjertelribonuklease som spesifikt bryter ned enkelttrådet RNA til mindre komponenter mens RNase H er et ikke-spesifikt enzym som sp alter RNA i RNA-DNA hybrid til mindre enheter via den hydrolytiske mekanismen.
Hva er RNASE A?
RNase A er en bukspyttkjertelribonuklease som spesifikt sp alter de uparrede cytosin- og uracilrestene i 3'-enden av enkelttrådet RNA. RNase H virker ved en høyere s altkonsentrasjon (0,3M eller høyere NaCl-konsentrasjon). Den hydrolytiske reaksjonen er to trinn. Det danner et 3'-fosforylert produkt via 2', 3'-syklisk monofosfat-mellomprodukt. Selv om det er spesifikt for enkelttrådet RNA ved høyere s altkonsentrasjon, kan det også bryte ned dobbelttrådet RNA og RNA i RNA-DNA-hybrid ved lavere NaCl-konsentrasjon (lavere enn 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield syntetiserte først dette enzymet. RNase A er et veldig populært enzym i molekylær forskning. Bovin bukspyttkjertel RNase A er et eksempel på RNase A. Og det er et av de hardeste enzymene som brukes i laboratoriet. Dette enzymet trenger ikke en kofaktor for sin aktivitet. Det er et svært termostabilt enzym. RNase A er det første enzymet og det tredje proteinet som en korrekt aminosyresekvens ble påvist til. Dette enzymet er veldig lite med 124 aminosyrer og molekylmasse på 12600da. Og den har fire histidinrester (His 12 og His 119 som involverer katalytisk reaksjon).
Figur 01: RNase A
RNase A kan isoleres ved å koke en råprøve. Når det koker, bryter alle andre enzymer ned gjenværende RNase A. RNase A er et utrolig stabilt enzym. Dette enzymet hemmer med ribonukleasehemmerprotein, tungmetall- og uridinvanadatkomplekser.
Hva er RNase H?
RNase H er et uspesifikt ribonukleaseenzym som kan bryte ned RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaksjon. RNase H sp alter 3'- O-P-bindingen til RNA i en RNA-DNA-hybrid. Til syvende og sist produserer den 3'OH og 5' fosfatterminerte produkter. I DNA-replikasjon spiller den en sentral rolle ved å fjerne RNA-primer etter at nye DNA-tråder er dannet. Under laboratorieforhold bryter den spesifikt ned RNA i RNA-DNA-hybrid, men ikke DNA og uhybridisert RNA. Og dette enzymet brukes vanligvis til å ødelegge RNA-malen etter at den første komplementære DNA-strengen er dannet under cDNA-syntese.
Figur 02: RNase H
RNase H brukes også i nukleasebeskyttelsesanalyser. Det kan også inkorporeres for fjerning av poly A-hale fra mRNA. RNase H har evnen til å ødelegge det ikke-kodende RNA i og utenfor cellen. Metallionene er nødvendige som kofaktorer for denne proteinaktiviteten. En chelator (EDTA) kan brukes til å hemme RNase H-enzymet.
Hva er likhetene mellom RNASE A og RNASE H?
- Begge er proteiner i naturen.
- Begge er endoribonuklease
- Begge kan degradere RNA.
- Begge utfører hydrolytiske reaksjoner.
- Molekylære laboratorier bruker begge disse.
Hva er forskjellen mellom RNASE A og RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNase A er en bukspyttkjertel-ribonuklease som spesifikt sp alter 3'-enden av uparrede cytosin- og uracilrester av enkelttrådet RNA ved høyere s altkonsentrasjon. | RNase H er et uspesifikt ribonukleaseenzym som kan bryte ned RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaksjon. |
| Naturen til RNA-sp alting | |
| RNase A sp alter spesifikt enkelttrådet RNA ved høyere s altkonsentrasjon. | RNase H sp alter RNA i RNA- DNA-hybrid. |
| Need of Co-factors for Activity | |
| RNase A trenger ikke kofaktorer for sin aktivitet. | RNase H trenger metallioner som kofaktorer for sin aktivitet. |
| Hemmere av proteinaktivitet | |
| Ribonukleasehemmerprotein-, tungmetall- og uridinvanadatkomplekser hemmer RNAse A-aktiviteten. | En chelator (EDTA) hemmer RNase H-aktivitet. |
| RNA-primerfjerning i DNA-replikering | |
| RNase A brukes ikke til fjerning av RNA-primer i DNA-replikasjon. | RNase H brukes for fjerning av RNA-primer i DNA-replikasjon |
| Fjerning av DNA-mal i komplementær DNA (C-DNA) syntese | |
| RNase A brukes ikke for fjerning av RNA-template under komplementær DNA (C-DNA) syntese. | RNase H brukes for fjerning av RNA-template under komplementær DNA (C-DNA) syntese. |
| Fjerning av poly-A-hale i mRNA hybridisert til oligo (dt) | |
| RNase A brukes ikke til å fjerne "poly-A-hale" i mRNA hybridisert til oligo (dt). | RNase H brukes til å fjerne "poly-A-hale" i mRNA hybridisert til oligo (dt) |
Sammendrag – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleasene er nukleaseenzymer som har evnen til å sp alte RNA til mindre enheter. De er to typer; endoribonukleaser og exoribonukleaser. Endoribonuklease er en endonuklease som har evnen til å bryte ned enkelt- eller dobbelttrådet RNA. Og den sp alter fosfodiesterbindingen i en RNA-polynukleotidkjede. RNase A og RNase H er to endoribonukleaser. RNase A er en bukspyttkjertelribonuklease som spesifikt sp alter uparrede cytosin- og uracilrester ved 3'-enden av det enkelttrådede RNA ved høyere s altkonsentrasjon. RNase H er et ikke-spesifikt ribonukleaseenzym som kan bryte ned RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaksjon. Dette er forskjellen mellom RNase A og RNase H.
Last ned PDF-filen RNASE A vs RNASE H
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til offline-formål i henhold til sitat. Last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom RNASE A og RNASE H
